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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧
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天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧

PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧，多谢了！
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1楼 2011-12-05 22:27:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shuangzi8761

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

天yi(金币+2): 2011-12-06 12:35:51
1.你的DNA模板问题：纯度不够，有RNA污染，拖尾的那些就是。解决方法在模板中加人适量RNase.
2.引物间形成引物二聚体：在你图的最上方那些模糊成团的就是。解决方法可以将一对引物用MNAMAN上面比下，看是否会有引物二聚体情况。
3.可根据PCR原理，提高退火温度，一般2-3度；增加Taq酶量，多加0.5倍；减少循环数，28~30cycle足够。
4.建议楼主换下M，从图上看你的目的带（最下面那些），比你M最大标量还大。
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5楼2011-12-06 09:40:55
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A406

新虫 (初入文坛)
个人觉得首先你要确定你的实验目的，不同目的实验要求也不同，其次确认模板是否符合你的PCR，鉴定的话模板纯度不够也可以，只要能有一定亮度的PCR条带，第三，明确你的目的条带电泳是在什么位置，PCR程序是否正确，引物是否有问题（做个阳性对照），二聚体是会影响条带亮度，但要是如果实验没有很高要求，比如鉴定，存在二聚体也没关系。
如果想通过PCR获得目的基因，那就在目的基因上下取二十多碱基作为引物（不用软件设计），只要电泳条带无杂带，大小合适，测序结果正常就OK，不行就换对引物呗，或者刚开始多合成几对引物，现在合成引物及测序也很便宜很快。
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6楼2011-12-06 12:56:39
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情系石河子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
天yi: 金币+1 2012-05-13 12:27:38
建议从下面几个方面考虑：
1.DNA模板
2.PCR条件
3.引物设计是否合理
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吃地苦中苦，方为人上人
8楼2011-12-07 09:37:50
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

天yi(金币+1): 2011-12-06 08:08:38
DNA 模板可能纯度不够，杂质干扰。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-12-06 01:00:30
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籽沐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

天yi(金币+1): 2011-12-06 12:28:51
用不含DNA酶的RNA酶处理一下，后面拖尾的亮的可能是RNA
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3楼2011-12-06 09:26:17
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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4楼2011-12-06 09:29:00
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cgspider

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
天yi: 金币+1 2012-05-09 19:45:27
总DNA咩？

后面很亮的可能是RNA，另外，也可能是因为加太多了。。
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你的能力撑不起你的野心
7楼2011-12-06 16:54:29
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
天yi: 金币+1 2012-05-09 19:45:41
看你的marker，觉得电泳时间不够，胶好像也没融好，所以有些歪，另外，可以把胶浓度加大一些，条带会细而亮。
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9楼2011-12-07 11:00:39
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329181203lin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2011-12-07 11:00:39:
看你的marker，觉得电泳时间不够，胶好像也没融好，所以有些歪，另外，可以把胶浓度加大一些，条带会细而亮。

胶浓度是指？
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10楼2012-05-08 21:14:21
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