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天yi

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[求助] PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧

PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧，多谢了！

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1楼2011-12-05 22:27:25

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shuangzi8761

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【答案】应助回帖

天yi(金币+2): 2011-12-06 12:35:51

1.你的DNA模板问题：纯度不够，有RNA污染，拖尾的那些就是。解决方法在模板中加人适量RNase.
2.引物间形成引物二聚体：在你图的最上方那些模糊成团的就是。解决方法可以将一对引物用MNAMAN上面比下，看是否会有引物二聚体情况。
3.可根据PCR原理，提高退火温度，一般2-3度；增加Taq酶量，多加0.5倍；减少循环数，28~30cycle足够。
4.建议楼主换下M，从图上看你的目的带（最下面那些），比你M最大标量还大。

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5楼2011-12-06 09:40:55

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A406

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个人觉得首先你要确定你的实验目的，不同目的实验要求也不同，其次确认模板是否符合你的PCR，鉴定的话模板纯度不够也可以，只要能有一定亮度的PCR条带，第三，明确你的目的条带电泳是在什么位置，PCR程序是否正确，引物是否有问题（做个阳性对照），二聚体是会影响条带亮度，但要是如果实验没有很高要求，比如鉴定，存在二聚体也没关系。
如果想通过PCR获得目的基因，那就在目的基因上下取二十多碱基作为引物（不用软件设计），只要电泳条带无杂带，大小合适，测序结果正常就OK，不行就换对引物呗，或者刚开始多合成几对引物，现在合成引物及测序也很便宜很快。

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6楼2011-12-06 12:56:39

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