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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！
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original900

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！ 已有6人参与

大家好！我做部分酶切后跑胶准备切胶，可是电泳图不知为何成为这个样子？很疑惑，不知该如何解决？请有经验的虫虫们帮忙解决一下，谢谢了！
    现把我试验的大致情况介绍如下：
    我将genomic DNA做Sau3AI的部分酶切预实验（50uL反应体系中，10 X H buffer 5 uL，Sau3AI 0.5 U，genomic DNA 44.5uL），按照5，10，15，20，25，30min分别反应后，跑胶确定最佳酶切条件，电泳图见图1. 图一中第一排第一个孔是DNA+buffer，第二至第五个孔分别是反应5，10，15，20min的酶切效果，第二排中间三个分别是反应25，30，35min的酶切效果。由于上样量很小所以条带不是很亮！但根据图我确定最佳酶切条件是20min。
       然后根据确定的最佳酶切条件进行大量酶切，酶切完成后跑胶，准备切胶回收，可是跑胶结果吓我一跳！泳道两周都是大量亮亮的一团物质，不知是什么？因为我在上样的时候也没有见到任何异常，样品没有漂，也没有溢出来，所以出现这样的结果不知道是什么原因？我又重新重新酶切，点样，跑胶，结果还是这样，所以不知道问题出在哪里？恳请各位指点，谢谢。大量酶切的电泳图见图2.
       备注：由于我要的是2kb以上的片段，所以电泳的时候RNA没有除，图片比较难看，影响整体效果，各位请仔细看啦，不好意思！
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1楼 2011-04-07 17:19:56
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-07 20:05:57
部分酶切结果救赎smear的，没有问题。大量酶切最好是多个50ul的体系并列，不要增大体积。

这个酶超级强。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-04-07 19:30:35
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jingcao3081

铁杆木虫 (职业作家)
可能酶的问题吧！
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活到老！学到老！
3楼2011-04-07 19:31:29
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original900

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-07 19:30:35:
部分酶切结果救赎smear的，没有问题。大量酶切最好是多个50ul的体系并列，不要增大体积。

这个酶超级强。

谢谢回复！
对的，我就是50uL体系并列切的，可是点样后跑胶就成那个样子啦，泳道外有很多东西，不知道为什么会出现这样的状况？点样没漂，也没有溢出来，不知为什么会是图2的效果？你见过这样的现象吗?
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4楼2011-04-07 20:58:07
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original900

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jingcao3081 at 2011-04-07 19:31:29:
可能酶的问题吧！

谢谢回复！
不知你所说酶的问题指的是什么问题？
我部分酶切的结果说明酶切是好的，只是不知为什么想大量回收的时候跑胶就变成那个样子了？
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5楼2011-04-07 21:00:26
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by original900 at 2011-04-07 20:58:07:
谢谢回复！
对的，我就是50uL体系并列切的，可是点样后跑胶就成那个样子啦，泳道外有很多东西，不知道为什么会出现这样的状况？点样没漂，也没有溢出来，不知为什么会是图2的效果？你见过这样的现象吗?

没看到过这样的状况。。。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2011-04-07 21:17:30
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original900

木虫 (小有名气)
谢谢回复！
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7楼2011-04-08 09:16:42
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liugs

禁虫 (正式写手)
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rainwander(金币+2): 鼓励交流·~~ 2011-04-08 15:37:21
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8楼2011-04-08 14:13:22
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original900

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liugs at 2011-04-08 14:13:22:
你有没有注意，第一张电泳图上也有类似的亮带；
我认为是由于所提的基因组DNA中含有其他能被你所用的染料着色的物质，而且这种物质可能带有部分正电荷，也有带负电荷的物质，他们在缓冲液中的泳动，造成了你电泳 ...

如果有你说的这种物质存在，那应该采取什么方法去除呢？照常理，采用经典的提DNA的方法应该不会有别的物质提出来？那样的话。多少实践过的同志们跑胶的时候也应该会看到这样的现象，可是现在似乎没有人看到！期待高人、牛人，达人解答......不胜感激！
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9楼2011-04-09 22:04:19
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sunwei57
RNA
10楼2012-03-17 12:22:41
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