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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Bio-rad蛋白电泳的问题请教，有图，希望有经验者多多指教！
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carot

金虫 (正式写手)

[求助] Bio-rad蛋白电泳的问题请教，有图，希望有经验者多多指教！

在实验室做蛋白电泳一直很顺利，图出来的效果也很好。但是这两次做的电泳拖带非常严重，查不出原因，把图贴出来，希望大家给点建议。
还有就是这两次异常电泳的电泳时间都拖的比较长，每次脱完色在胶的底部都会出现一条很粗的深蓝色长条带，以前都没有出现过，希望有此类经验的虫虫不吝赐教，谢谢！

以前做的正常的电泳图



这两次的异常的电泳图
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1楼 2011-12-02 11:08:56
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

carot(金币+50): 1 2011-12-02 15:09:46
电泳buffer是配的浓贮液，现用现稀释的么？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-12-02 12:54:31
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carot

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-02 12:54:31:
电泳buffer是配的浓贮液，现用现稀释的么？

是的 10*buffer 稀释前有混匀 稀释后pH是8.3 最近新配了一批
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3楼2011-12-02 13:51:24
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jiying198509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励新虫！ 2011-12-03 22:20:42
看上去像是胶的问题 因为Marker似乎也有问题
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4楼2011-12-02 14:51:48
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carot

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiying198509 at 2011-12-02 14:51:48:
看上去像是胶的问题 因为Marker似乎也有问题

marker是有问题 后来单独跑marker也是一样的拖带 但是还是可以看清楚的的 样品就不行
能详细说说是胶哪里有问题吗 配胶的方法和配胶的溶液都是以前用过的 没有什么不一样 照理来说 电泳效果也不应该相差这么多的
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5楼2011-12-02 15:09:27
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robert1988

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 有可能 2011-12-03 22:21:02
AP是新鲜配制的吗？
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6楼2011-12-02 18:54:58
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
感觉是buffer有问题
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7楼2011-12-02 19:48:54
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流!有道理! 2011-12-02 22:36:46
个人感觉是你的电泳时间太长，热量产生太大影响到了胶，你放在冰水里进行电泳试一试看~！
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
8楼2011-12-02 21:33:50
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-03 22:21:19
有的时候 上样buffer中蔗糖多了,会在底部将带压成一道线!
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真相是最大的奢侈品
9楼2011-12-02 22:40:51
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carot

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-12-02 21:33:50:
个人感觉是你的电泳时间太长，热量产生太大影响到了胶，你放在冰水里进行电泳试一试看~！

是放在冰水里电泳的 但是电泳时间很长 感觉蛋白跑不下去的样子 蛋白是脱盐后上的样 所以应该不是盐浓度的问题 所以就很郁闷
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10楼2011-12-03 08:19:07
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