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txyamy

木虫 (小有名气)

[求助] 请帮忙推荐下蛋白电泳装置， 或洒点蛋白纯化 or PAGE 经验啊！

打算跑蛋白非变性胶 割胶，蛋白用柱子分离了快一年了，就是纯化不出来，所以，准备放弃
想跑小胶试下，要是割胶的话还是用大胶好点吧，希望高手给点意见，或者有相似经历的虫虫们给点经验吧
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1楼 2011-08-20 17:20:24
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madengyu

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-21 09:11:35
txyamy(金币+5): 呵呵，厉害~ 我的就是不好分，分子量相差不大 2011-08-23 20:59:18
本帖内容被屏蔽
2楼2011-08-21 08:55:08
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by txyamy at 2011-08-20 17:20:24:
打算跑蛋白非变性胶 割胶，蛋白用柱子分离了快一年了，就是纯化不出来，所以，准备放弃
想跑小胶试下，要是割胶的话还是用大胶好点吧，希望高手给点意见，或者有相似经历的虫虫们给点经验吧: ...

你给的信息太少了 呵呵
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txyamy txyamy
3楼2011-08-23 14:37:42
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txyamy

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 辉辉集团 at 2011-08-23 14:37:42:
你给的信息太少了 呵呵

我是分离纯化酪蛋白，它们分子量相差不大，30kDa-14kDa，我用柱子分的效果很不好，所以想割胶 得纯品， 还需要其他什么信息吗？
谢谢啊
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4楼2011-08-23 21:01:51
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txyamy

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 辉辉集团 at 2011-08-23 14:37:42:
你给的信息太少了 呵呵

我是分离纯化酪蛋白，它们分子量相差不大，30kDa-14kDa，我用柱子分的效果很不好，所以想割胶 得纯品， 还需要其他什么信息吗？
谢谢啊 鲜花送上~
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5楼2011-08-23 21:02:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-08-26 17:45:51
既然分子量相差不大，那么还是用利用性质来分离的层析柱好，因为分子量相差不大的蛋白质跑胶不知道能不能分开，如果用小胶那割出来的多半是有邻近的杂质蛋白质的，但是分子量相同的蛋白质可能某些性质不同的，所以用离子交换层析柱和疏水层析柱可能可以分离。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-08-24 00:56:01
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shrimp5555

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎新虫交流 2011-08-26 17:46:06
txyamy(金币+5): 谢谢啊，那回收的打质谱，做圆二色量够用吗？ 2011-10-06 10:43:40
跑电泳后的蛋白都回收很少的，回收率不高
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大大傻气加上少少耍流氓
7楼2011-08-26 14:53:37
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 欢迎常来！ 2012-01-10 17:33:40
做分析还是做生产啊？做生产还是考虑层析吧，层析胶有好多种啊，建议使用离子交换配合亲和层析
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8楼2012-01-10 12:54:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2, 专家考核): 新年快乐哈~ 2012-01-22 20:14:23
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-24 00:56:01:
既然分子量相差不大，那么还是用利用性质来分离的层析柱好，因为分子量相差不大的蛋白质跑胶不知道能不能分开，如果用小胶那割出来的多半是有邻近的杂质蛋白质的，但是分子量相同的蛋白质可能某些性质不同的，所以 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4054503&fpage=1
蛋白质纯化——非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后回收蛋白质的简单方法


先跑一次非变性胶看看分离效果，如果能分得开就看我给出的这个帖子。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2012-01-22 17:15:28
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