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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PAGE凝胶蛋白电泳用（梳孔有残留胶）
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duzclaire

金虫 (小有名气)

[求助] PAGE凝胶蛋白电泳用（梳孔有残留胶）

不知道是不是现在天气热了的原因，胶凝的特别快，每次做完胶梳孔内都有胶残留导致我之后上样很困难，配方是6%的浓缩胶，聚合1h后，拔去梳子，每个孔都有残留胶。请各位高手指点~~

[ Last edited by duzclaire on 2011-5-3 at 09:39 ]
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1楼2011-05-03 09:37:57
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-05-03 20:14:19
温度适当的情况下  浓缩胶半小时就会凝好  假如你不急着要跑的话  放四度冰箱里面就会阻止其缩胶  等需要跑的时候再用，就不会出现缩胶的情况了
还有你插梳子的时候如果有很多浓缩胶溢出  你可以用滤纸吸一下
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与人玫瑰手有余香
2楼2011-05-03 10:46:02
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duzclaire

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-05-03 10:46:02:
温度适当的情况下  浓缩胶半小时就会凝好  假如你不急着要跑的话  放四度冰箱里面就会阻止其缩胶  等需要跑的时候再用，就不会出现缩胶的情况了
还有你插梳子的时候如果有很多浓缩胶溢出  你可以用滤纸吸一下

谢谢啊~~不过我不是缩胶的问题，我是加样的梳孔内有胶残留，感觉就像是梳子小了导致的，但这是配套的梳子，冬天做的时候就没这个问题
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3楼2011-05-03 17:30:40
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-05-03 20:14:26
duzclaire(金币+4): 谢谢啊~~~解答得很仔细，马上试试 2011-05-04 14:29:56
现在温度高了，APS和TEMED的量需要减少，分离胶APS和TEMED量过高，胶边缘会产生气泡，浓缩胶的APS和TEMED量过高，会凝的很快(10min之内凝就该注意了)，拔下梳子后胶孔会有保鲜膜装的凝胶残留，将胶孔堵塞，影响样品上样。试试将浓缩胶里面APS和TEMED的量改为原来的60%，会有改善。
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4楼2011-05-03 17:50:15
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vanvan

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

duzclaire(金币+2): 谢谢~~~请问是什么缓冲溶液呢？电泳缓冲还是浓缩胶的缓冲溶液？ 2011-05-04 14:32:01
呵呵，遇到类似的问题，拔梳子前先加缓冲液吧
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机遇与挑战并存,梦想与困难共生
5楼2011-05-03 19:59:45
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yitiandeng

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

先加缓冲液待机分钟拔梳子就OK
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6楼2011-05-12 21:28:59
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shandongfmmu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没有遇到这个问题～不过有了心理准备～以前遇过胶不凝的时候
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快乐~~~~~~~
7楼2011-05-13 00:16:06
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
LZ，我最近也遇到同样的问题，不知道有办法解决吗》》？？？
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8楼2012-03-19 23:50:57
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wingshelen

新虫 (初入文坛)
★ ★
telomerase: 金币+2, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-03-25 14:33:22
我也有这样的问题啊···但是还不知道该怎么解决呢···
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9楼2012-03-25 12:51:43
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
有胶比较正常，和梳子的匹配度有关，进口的好些。有时那个加样空的胶还会缩回来些呢
拔前加buffer，在buffer里拔是会好点，至于降低APS和TEMED的量的方法没试过，
另外就是，跑前用枪或注射器使劲冲冲每个孔，多多少少会好点。用针头进去刮刮也行。
加了梳子以后尽量不要碰梳子，补液（防止胶孔那个边缩短）时小心点
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
10楼2012-03-25 14:36:14
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