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jack_1128

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 血红蛋白---凝胶电泳

大家好!

想请教一下,一个血红蛋白由四个亚基组成,要是跑电泳,只想跑出它四个亚基的带,大约在64000左右的带,而不想让其二聚体或者单聚体的带出现,可以吗?因为我想看一下我的血红蛋白粉末配成的溶液中的血红蛋白是否解聚了?解聚了我就不能用了

我这几天刚跑了一次,发现总是有三条带,即64000,32000,16000左右,也就是它的四聚体,二聚体,单聚体对应的带。

谢谢!请多多指教!我不做电泳方面,所以一点也不懂,请您赐教!再次感谢!!
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

jack_1128(金币+10, 博学EPI+1): 您如果懂这方面的话,麻烦您再回答一下我下面的问题,可以吗?谢谢!!! 2011-11-03 11:35:42
你应该跑的是非变性的电泳吧,有三条带也正常,四聚体,二聚体,单聚之间应该是存在一个动态平衡的。
低调务实!
2楼2011-11-03 10:30:43
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jack_1128

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2011-11-03 10:30:43:
你应该跑的是非变性的电泳吧,有三条带也正常,四聚体,二聚体,单聚之间应该是存在一个动态平衡的。

就是没加巯基乙醇,也没加热,那如何才能只跑出一条四聚体的带呢?

或者如何才能证明只有四聚体呢?

非常感谢!!!
3楼2011-11-03 11:34:38
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

买合适的超滤管离心管,滤掉二聚体和单体,剩余的主要是四聚体,然后再跑胶

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低调务实!
4楼2011-11-03 14:49:11
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jack_1128

铁杆木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2011-11-03 14:49:11:
买合适的超滤管离心管,滤掉二聚体和单体,剩余的主要是四聚体,然后再跑胶

超滤管离心管?

四聚体在跑非变性胶时不会自动解离?

谢谢啊!
5楼2011-11-03 14:58:48
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

关键要选好超滤管的规格,你这个选截留分子量为30kDa的比较合适。超滤过程中,64KDa的会被浓缩,而32kDa和16kDa的绝大部分会被除掉,这样64kDa
的相对比例提高很多。跑胶过程中64kDa的可能还会部分解离,但是32和16kDa的比例会少很多,胶上可能看不出来的。
低调务实!
6楼2011-11-03 16:41:30
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jack_1128

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2011-11-03 16:41:30:
关键要选好超滤管的规格,你这个选截留分子量为30kDa的比较合适。超滤过程中,64KDa的会被浓缩,而32kDa和16kDa的绝大部分会被除掉,这样64kDa
的相对比例提高很多。跑胶过程中64kDa的可能还会部分解离,但是32和 ...

谢谢啊,我已经用透析袋透析了,用截留分子量为5万的透析了,呵呵!
再次感谢!!!
7楼2011-11-03 20:28:27
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