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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊

我是按照TCA/丙酮沉淀方法，提取总蛋白用来跑双向的，跑双向之前，先用SDS-PAGE,检测了下蛋白质量，但是看到这张图，我不知道该怎么办，请大家帮忙分析下啊，图上的右边3个，为蛋白样品，右边第4为Marker泳道
为什么我的蛋白样品，就中间一块有呢，高分子量和低分子量都是空白呢？？还有就是带很模糊，这是降解的原因吗？？请高手给指点下 啊。先谢谢了啊

总蛋白的检测胶图

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-17 at 19:26 ]
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1楼 2011-10-17 02:09:58
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求索寻觅

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励下 2011-10-17 19:27:18
hrjxx(金币+1): 谢谢啊 ，图是很烂，但是全蛋白应该分布在整个泳道，为什么就集中在中间快呢，谢谢你的建议，不过我想只能给你2分 2011-10-17 20:05:49
我觉得你你的胶没配好，mark一般跑的比较好的，你这mark的图谱都这么差，我只能推测是胶的问题了。你的ap是新配的吗？如果是，你跑胶时候的电压或者电流是多大呢？还有，mark点样时你注意的浓度了没？
我也做这个时间不是很长，但是我的一向SDS-PAGE效果比你的好些，楼主注意下操作吧。
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4楼2011-10-17 18:51:13
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eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 很有道理 2011-10-19 18:37:19
楼主，你的胶一边收缩，一边好着，很可能是两块玻璃板没有夹好，有点从下面漏液，还有胶一点要混匀，否则电泳图跑出来会拖尾，模糊。
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7楼2011-10-18 08:28:09
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普通回帖

hrjxx

新虫 (小有名气)
为什么我的蛋白样品，就中间一块有呢，高分子量和低分子量都是空白呢？？还有就是带很模糊，这是降解的原因吗？？请高手给指点下 啊。先谢谢了啊
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2楼2011-10-17 02:11:25
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)
西瓜: 给点建议啊 2011-10-17 18:40:29
这电泳是看到的最烂的
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3楼2011-10-17 17:40:47
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
hrjxx(金币+1): 2011-10-17 20:06:06
西瓜(金币+1): good 2011-10-19 18:37:01
先把marker跑好，确定排除电泳本身问题，再讨论样品条带
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5楼2011-10-17 19:37:20
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fisheart at 2011-10-17 19:37:20:
先把marker跑好，确定排除电泳本身问题，再讨论样品条带

谢谢啊，其实我只是检测下，全蛋白有无的问题，没有想到跑成这样了，问题是全蛋白不应该只分布在中间一块啊，这是我问得核心啊（胶不好，可能是我丙烯酰胺储液放的时间太长了吧），还有就是，我的胶凝固以后，为什么一边会收缩的厉害，一边好着呢？？有人说因为没有混匀，但是以前为什么没事呢？？？？
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6楼2011-10-17 20:09:00
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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【答案】应助回帖

我一开始看还以为拍照片的手抖了。。。。
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8楼2011-10-18 08:49:10
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kristine2011

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-10-19 18:37:48
胶没配好吧。丙烯酰胺储液放置时间影响不大，3楼说的ap应该指的是过硫酸铵吧，不是指丙烯酰胺，总之可能还是胶没有凝好。不均匀。一边收缩的厉害那就是漏胶了。这种情况就不能在用这边的孔了。玻璃板夹好后，还是要验一下漏不漏的。
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9楼2011-10-18 09:35:21
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hrjxx

新虫 (小有名气)
wanhscn: 双向与SDS-PAGE的体系原理一样吗? 2011-10-18 18:44:46
引用回帖:
9楼: Originally posted by kristine2011 at 2011-10-18 09:35:21:
胶没配好吧。丙烯酰胺储液放置时间影响不大，3楼说的ap应该指的是过硫酸铵吧，不是指丙烯酰胺，总之可能还是胶没有凝好。不均匀。一边收缩的厉害那就是漏胶了。这种情况就不能在用这边的孔了。玻璃板夹好后，还是 ...

谢谢楼上各位，我胶重新跑了一遍，胶确实跑的不好了，但是其实我想知道的是，为什么我的全蛋白不是充满整个泳道呢？？仅仅就2-3条带呢？？是没有提出来？？还是中间降解？？还是跑出去了？？？整个是核心啊，以后没有人给帮忙分析下啊 ，

最右边是Marker，左二为全蛋白样品，为什么就3条带呢？
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10楼2011-10-18 10:57:56
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