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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
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孟王氏

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题

很纠结，最近跑蛋白胶，我的都是这个样子，别人的都没有问题，我的发酵液中有金属离子，可能有较多残留，会不会是这个问题，应该怎么解决呢?谢谢啊～～～

好纠结，上面半块胶什么都没有



这个maker还好，别的就不行。maker左边的是别人的蛋白。。右边是我的蛋白
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1楼 2011-10-25 00:29:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shenxing325

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+2): Good！ 2011-10-28 17:57:42
wanhscn(金币+2): 鼓励新虫发帖！ 2011-10-28 17:57:55
根据你第一个图来看，你这个上半部分完全没有把蛋白质分子截留住，所以你这个胶的浓度肯定是不均匀的，配胶是不是有问题。另外，其实电压浓缩胶80v，分离胶120v就够了，浓缩胶可以再长一点，记得要压成一条直线喔~时间长一点没关系的。还有，你的缓冲溶液的pH是不是有问题，那个影响也会很大的。不知道能不能帮到你
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19楼2011-10-28 17:10:17
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普通回帖

孟王氏

金虫 (小有名气)
自己先顶一下～～希望大家帮忙啊～～～
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2楼2011-10-25 00:30:02
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jakelly

金虫 (著名写手)

小小科学家

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-25 11:02:13
孟王氏(金币+10): 给的建议很好，我的就是凝胶的问题，Ap过期导致的谢谢你 2011-10-25 23:46:33
出现这种现象有可能是凝胶的质量不过关，凝胶时间不致导致凝胶内部浓度不均匀，条带跑歪；还有一种可能是电压过高，受热使条带变形，考虑电泳时放入冰浴降温，或调低电压；还有就是可能是上样的样品问题，就是你说提到的。
如果还有其它问题，可以进一步交流，我们实验室几乎天天做western.
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孟王氏
爱人的人爱的我
3楼2011-10-25 01:29:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
西瓜(金币+1): 好久不见 2011-10-25 17:53:27
是marker（标记）而不是maker（制造者）

你的标记出来了5条，原本是多少条？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-10-25 06:21:20
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tianshu0803

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 加样前注意看一下胶的底部，尽量不要有气泡，气泡也会影响胶两头的电压：Good！ 2011-10-25 11:01:53
孟王氏(金币+5): 谢谢你的帮助，我的问题解决了，主要原因还是胶的浓度不均匀，电压也有点偏高 2011-10-25 23:48:04
1：胶的浓度不均匀  2：电压过高 一般150伏就很高了  3：加样前注意看一下胶的底部，尽量不要有气泡，气泡也会影响胶两头的电压  4：跑之前，要仔细清洗一下实验器材，保证两个电极铁丝上没有杂物。
呵呵，做实验小心点总是没有错的。
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孟王氏
5楼2011-10-25 09:31:12
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孟王氏

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-25 01:29:18:
出现这种现象有可能是凝胶的质量不过关，凝胶时间不致导致凝胶内部浓度不均匀，条带跑歪；还有一种可能是电压过高，受热使条带变形，考虑电泳时放入冰浴降温，或调低电压；还有就是可能是上样的样品问题，就是你说 ...

调低电压用150V跑到底依然出现这个情况啊。。那如果是样品问题的话，应该怎么解决呢？
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6楼2011-10-25 13:03:22
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孟王氏

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-10-25 06:21:20:
是marker（标记）而不是maker（制造者）

你的标记出来了5条，原本是多少条？

原本是7条，但是我们一般也就能跑出来5条
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7楼2011-10-25 13:05:11
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孟王氏

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by tianshu0803 at 2011-10-25 09:31:12:
1：胶的浓度不均匀  2：电压过高 一般150伏就很高了  3：加样前注意看一下胶的底部，尽量不要有气泡，气泡也会影响胶两头的电压  4：跑之前，要仔细清洗一下实验器材，保证两个电极铁丝上没有杂物。
呵呵，做实 ...

胶的底部气泡赶不出来啊？而且之前跑胶也没有注意过这个问题，跑的也还好。。谢谢啊
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8楼2011-10-25 13:09:25
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孟王氏

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-25 01:29:18:
出现这种现象有可能是凝胶的质量不过关，凝胶时间不致导致凝胶内部浓度不均匀，条带跑歪；还有一种可能是电压过高，受热使条带变形，考虑电泳时放入冰浴降温，或调低电压；还有就是可能是上样的样品问题，就是你说 ...

对了，我也用冰浴降温做过一次，得到结果跟这个差不多啊。。
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9楼2011-10-25 13:11:16
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mlazs

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该就是制备的胶不行，浓度不均匀
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孟王氏
10楼2011-10-25 14:21:20
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