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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
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孟王氏

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题

很纠结，最近跑蛋白胶，我的都是这个样子，别人的都没有问题，我的发酵液中有金属离子，可能有较多残留，会不会是这个问题，应该怎么解决呢?谢谢啊～～～

好纠结，上面半块胶什么都没有



这个maker还好，别的就不行。maker左边的是别人的蛋白。。右边是我的蛋白
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1楼 2011-10-25 00:29:29
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孟王氏

金虫 (小有名气)
自己先顶一下～～希望大家帮忙啊～～～
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2楼2011-10-25 00:30:02
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孟王氏

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-25 01:29:18:
出现这种现象有可能是凝胶的质量不过关，凝胶时间不致导致凝胶内部浓度不均匀，条带跑歪；还有一种可能是电压过高，受热使条带变形，考虑电泳时放入冰浴降温，或调低电压；还有就是可能是上样的样品问题，就是你说 ...

调低电压用150V跑到底依然出现这个情况啊。。那如果是样品问题的话，应该怎么解决呢？
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6楼2011-10-25 13:03:22
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孟王氏

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-10-25 06:21:20:
是marker（标记）而不是maker（制造者）

你的标记出来了5条，原本是多少条？

原本是7条，但是我们一般也就能跑出来5条
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7楼2011-10-25 13:05:11
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孟王氏

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by tianshu0803 at 2011-10-25 09:31:12:
1：胶的浓度不均匀  2：电压过高 一般150伏就很高了  3：加样前注意看一下胶的底部，尽量不要有气泡，气泡也会影响胶两头的电压  4：跑之前，要仔细清洗一下实验器材，保证两个电极铁丝上没有杂物。
呵呵，做实 ...

胶的底部气泡赶不出来啊？而且之前跑胶也没有注意过这个问题，跑的也还好。。谢谢啊
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8楼2011-10-25 13:09:25
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孟王氏

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by jakelly at 2011-10-25 01:29:18:
出现这种现象有可能是凝胶的质量不过关，凝胶时间不致导致凝胶内部浓度不均匀，条带跑歪；还有一种可能是电压过高，受热使条带变形，考虑电泳时放入冰浴降温，或调低电压；还有就是可能是上样的样品问题，就是你说 ...

对了，我也用冰浴降温做过一次，得到结果跟这个差不多啊。。
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9楼2011-10-25 13:11:16
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孟王氏

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
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10楼: Originally posted by mlazs at 2011-10-25 14:21:20:
应该就是制备的胶不行，浓度不均匀

恩估计有可能，我重新买了Ap在试呢。。在想是不是AP不行，导致的
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12楼2011-10-25 20:29:00
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孟王氏

金虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by mengfei8336 at 2011-10-25 16:34:29:
蛋白胶的质量很重要的，其他的影响都不大，建议楼主再好好练习下做胶的技术，不要急于求成，从你的图来看明显就是胶没做好。

哦。。。
13楼2011-10-25 20:34:41
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孟王氏

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
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17楼: Originally posted by lingorling at 2011-10-26 17:23:16:
应该是胶 的问题吧，我也做过，但是不多，从楼主的问题中长了很多见识

呵呵是胶的问题，我已经搞定了呵呵
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18楼2011-10-28 16:21:44
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孟王氏

金虫 (小有名气)
西瓜: 回帖置顶 2012-05-31 09:36:29
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19楼: Originally posted by shenxing325 at 2011-10-28 17:10:17:
根据你第一个图来看，你这个上半部分完全没有把蛋白质分子截留住，所以你这个胶的浓度肯定是不均匀的，配胶是不是有问题。另外，其实电压浓缩胶80v，分离胶120v就够了，浓缩胶可以再长一点，记得要压成一条直线喔 ...

谢谢你啊，你的分析很到位，我的问题已经解决了，就是胶不够均匀，有个试剂有点过期了
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20楼2011-10-29 11:05:53
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