应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
211/1返回列表
查看: 12901  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kerry2011

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？

我从一株细菌中筛选蛋白酶，发酵液测出了不错的蛋白酶活，但是发酵液超滤浓缩以后，样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带，不加热直接上样，SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带，这是为何？
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀，重溶，透析，再跑SDS-PAGE，煮过的样品弥散，几乎没有主带，不煮的样品有多条带，这是为何？
请虫友们指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-06 09:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:28:27
加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-04-06 14:23:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

goldfox1981

木虫 (著名写手)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-06 18:04:17
是不是加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开啊，长链断裂呈短的多肽链
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-04-06 09:47:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郝钊

金虫 (小有名气)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
不懂，学习一下……
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-06 11:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

802311820

金虫 (小有名气)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
不懂，帮顶
回复此楼
5楼2011-04-07 09:56:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjlbest

木虫 (著名写手)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:28:55
加热煮的话，一般是破坏蛋白的空间结构，蛋白都是线性的，按照蛋白的分子量大小不同来分离，而没有煮的话，蛋白的空间结构依然完好，所以跑得快慢就不止和分子量有关了，还和它的空间结构有关，所以SDS-PAGE电泳结果差异显著也就不足为奇了。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-04-08 19:37:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wazlf

银虫 (正式写手)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:29:40
加热煮的话，蛋白质的空间结够被破坏了，就是变性，属于不可能复性的变性，如果煮的时间长，就可能导致蛋白质的一级结构破坏，形成分子量不同的蛋白，甚至多肽，就是出现了你说的很多条带。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-04-13 10:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

30937747

木虫 (小有名气)

..

★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:30:07
加热煮沸就是为了破坏蛋白质的高级结构.煮过的蛋白跑胶就不会受到它本身高级结构的影响,只和大小相关.不煮的话,跑胶的速率就与很多其他因素相关,特别是高级结构.
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2011-04-13 14:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kerry2011

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-04-13 10:51:17:
加热煮的话，蛋白质的空间结够被破坏了，就是变性，属于不可能复性的变性，如果煮的时间长，就可能导致蛋白质的一级结构破坏，形成分子量不同的蛋白，甚至多肽，就是出现了你说的很多条带。

可是有的时候，煮过后SDS-PAGE上没有任何条带了，不煮就有条带？
赞一下 回复此楼
9楼2011-04-14 15:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我要飞ddd

新虫 (初入文坛)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
我这胶都不凝，无语了
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-08-21 10:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
10楼: Originally posted by 我要飞ddd at 2011-08-21 10:58:09:
我这胶都不凝，无语了

论坛上有你这问题的相关帖子，你搜索一下
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-08-21 20:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梓魅

铜虫 (正式写手)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
染不上色的话，可能也与灵敏度有关吧
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-12-08 11:49:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

296595127

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
煮过的蛋白和未煮过的蛋白测蛋白质浓度会有区别吗？希望虫友指教
赞一下 回复此楼
13楼2012-04-26 22:38:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清风散人

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1204134楼: Originally posted by 我要飞ddd at 2011-08-21 10:58:09
我这胶都不凝，无语了

我的样品第二次煮沸后第二次跑效果居然更好，怎么回事呢
赞一下 回复此楼
14楼2012-08-04 20:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加热主要是使蛋白质空间结构破坏，减小影响电泳迁移率的因素。你检测的是蛋白酶，样品最好加蛋白酶抑制剂后再处理。煮的时候，不能超过98度，5分钟。等温度达到以后迅速放入样品，不能在温度没到的时候放入样品等待升温。有的蛋白酶是能自我降解的。
赞一下 回复此楼
15楼2012-08-04 20:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

conanzzz

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
741285楼: Originally posted by kerry2011 at 2011-04-14 15:35:43
可是有的时候，煮过后SDS-PAGE上没有任何条带了，不煮就有条带？...

我也发现煮过后居然什么条带都没有了,这是为什么呢
赞一下 回复此楼
16楼2012-12-14 10:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鲍鲍田园

新虫 (初入文坛)
不懂， 学习了
回复此楼
17楼2013-04-22 15:20:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加热肯定会破坏蛋白质的结构，如果你的样品中没有明显影响蛋白跑胶结果的东西就不用加热了，普通SDS-PAGE是变性胶，里面的SDS会破坏蛋白，你可以试试非变性胶能跑出你真正的蛋白大小
赞一下 回复此楼
18楼2013-04-22 17:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小米呐

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-04-22 17:08:22
加热肯定会破坏蛋白质的结构，如果你的样品中没有明显影响蛋白跑胶结果的东西就不用加热了，普通SDS-PAGE是变性胶，里面的SDS会破坏蛋白，你可以试试非变性胶能跑出你真正的蛋白大小

请问下，今天跑出来的胶Marker没显示出来，朋友说可以尝试胶样品加热，可以吗？
赞一下 回复此楼
19楼2013-07-03 20:27:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by 小小米呐 at 2013-07-03 20:27:14
请问下，今天跑出来的胶Marker没显示出来，朋友说可以尝试胶样品加热，可以吗？...

你的胶Marker没显示的话你是不是换下marker试试，加热胶样品一般只有在做细胞沉淀或者有尿素时采用
赞一下 回复此楼
20楼2013-07-04 08:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青蛙良

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，你的问题解决了没？
赞一下 回复此楼
21楼2015-03-10 09:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kerry2011 的主题更新
211/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 电子信息270求调剂 +4 terminal469 2026-04-07 4/200 2026-04-07 17:15 by 4201020126
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +5 won_qii 2026-04-07 5/250 2026-04-07 17:10 by 啵啵啵0119
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 9/450 2026-04-07 13:05 by flydream1314
[考研] 080500求调剂 +12 黄宇博 2026-04-06 12/600 2026-04-07 12:41 by upczlm1989
[考研] 295求调剂 +18 xndjjj 2026-04-04 19/950 2026-04-07 11:02 by wangjy2002
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +3 在线求有学上 2026-04-07 3/150 2026-04-07 10:24 by kk112233
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +4 q小倩1210 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:59 by jp9609
[考研] 285求调剂 +15 哦呦呼o 2026-04-04 17/850 2026-04-06 23:02 by chenzhimin
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 085600专硕材料与化工348分求调剂 +10 上学啦！ 2026-04-01 11/550 2026-04-03 14:13 by 百灵童888
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭