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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？
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kerry2011

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？

我从一株细菌中筛选蛋白酶，发酵液测出了不错的蛋白酶活，但是发酵液超滤浓缩以后，样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带，不加热直接上样，SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带，这是为何？
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀，重溶，透析，再跑SDS-PAGE，煮过的样品弥散，几乎没有主带，不煮的样品有多条带，这是为何？
请虫友们指教。
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1楼2011-04-06 09:34:37
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加热肯定会破坏蛋白质的结构，如果你的样品中没有明显影响蛋白跑胶结果的东西就不用加热了，普通SDS-PAGE是变性胶，里面的SDS会破坏蛋白，你可以试试非变性胶能跑出你真正的蛋白大小
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18楼2013-04-22 17:08:22
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goldfox1981

木虫 (著名写手)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-06 18:04:17
是不是加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开啊，长链断裂呈短的多肽链
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2楼2011-04-06 09:47:17
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郝钊

金虫 (小有名气)
★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
不懂，学习一下……
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3楼2011-04-06 11:23:10
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:28:27
加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-04-06 14:23:07
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