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kerry2011

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮,SDS-PAGE结果差异显著,这是为何?

我从一株细菌中筛选蛋白酶,发酵液测出了不错的蛋白酶活,但是发酵液超滤浓缩以后,样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带,不加热直接上样,SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带,这是为何?
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀,重溶,透析,再跑SDS-PAGE,煮过的样品弥散,几乎没有主带,不煮的样品有多条带,这是为何?
请虫友们指教。
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wazlf

银虫 (正式写手)


★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:29:40
加热煮的话,蛋白质的空间结够被破坏了,就是变性,属于不可能复性的变性,如果煮的时间长,就可能导致蛋白质的一级结构破坏,形成分子量不同的蛋白,甚至多肽,就是出现了你说的很多条带。
7楼2011-04-13 10:51:17
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goldfox1981

木虫 (著名写手)


★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-06 18:04:17
是不是加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开啊,长链断裂呈短的多肽链
2楼2011-04-06 09:47:17
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郝钊

金虫 (小有名气)



kerry2011(金币+1):谢谢参与
不懂,学习一下……
3楼2011-04-06 11:23:10
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★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:28:27
加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开
4楼2011-04-06 14:23:07
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