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kerry2011

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮,SDS-PAGE结果差异显著,这是为何?

我从一株细菌中筛选蛋白酶,发酵液测出了不错的蛋白酶活,但是发酵液超滤浓缩以后,样品加热煮过之后SDS-PAGE只在30K左右有一条带,不加热直接上样,SDS-PAGE在45-70K Da之间有多条带,这是为何?
发酵液通过55%的硫酸盐沉淀,重溶,透析,再跑SDS-PAGE,煮过的样品弥散,几乎没有主带,不煮的样品有多条带,这是为何?
请虫友们指教。
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robert-RBT

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
加热主要是使蛋白质空间结构破坏,减小影响电泳迁移率的因素。你检测的是蛋白酶,样品最好加蛋白酶抑制剂后再处理。煮的时候,不能超过98度,5分钟。等温度达到以后迅速放入样品,不能在温度没到的时候放入样品等待升温。有的蛋白酶是能自我降解的。
15楼2012-08-04 20:57:17
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goldfox1981

木虫 (著名写手)


★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-06 18:04:17
是不是加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开啊,长链断裂呈短的多肽链
2楼2011-04-06 09:47:17
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郝钊

金虫 (小有名气)



kerry2011(金币+1):谢谢参与
不懂,学习一下……
3楼2011-04-06 11:23:10
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★ ★
kerry2011(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+1): 谢谢参与 2011-04-13 14:28:27
加热煮沸有助于蛋白的二硫键打开
4楼2011-04-06 14:23:07
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