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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
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doublehelix

木虫 (著名写手)
大家分析的挺有道理的，胶居然还能跑成这样，长见识了
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11楼2011-10-18 11:01:26
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skyseaapple

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hrjxx(金币+3): 谢谢啊，你是说蛋白没有提出来吗 2011-10-19 18:21:28
这个胶...长见识了...应该不是电泳的问题，是你提取蛋白的问题，你可以用超声破碎再试试
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12楼2011-10-18 13:37:05
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violetice

银虫 (小有名气)
提的是什么样品的全蛋白阿？
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13楼2011-10-18 14:00:38
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by violetice at 2011-10-18 14:00:38:
提的是什么样品的全蛋白阿？

你好啊 ，是牛肉总蛋白啊
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14楼2011-10-19 18:20:27
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我要长大

银虫 (初入文坛)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-10-23 22:59:11
我也出现过你这样的问题，我觉得一方面是蛋白开始有降解，还有就是胶的配置过程，丙烯酰胺最多放一个月就不能再用了，这是我的一些经验。
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15楼2011-10-19 18:41:07
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 我要长大 at 2011-10-19 18:41:07:
我也出现过你这样的问题，我觉得一方面是蛋白开始有降解，还有就是胶的配置过程，丙烯酰胺最多放一个月就不能再用了，这是我的一些经验。

后来你是怎么解决的啊？？是换丙烯酰胺了，还是重新提的蛋白啊 ？？请指教下啊
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16楼2011-10-19 19:04:43
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hrjxx

新虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励上图！祝实验顺利啊！ 2011-10-23 22:59:42
谢谢楼上的啊，我蛋白重新提了次，是这样的条带，比以前进步了点，但是没有高分子量的，这是怎么回事啊 。是降解吗》》还是高分子量的比较难溶解啊，还是肉样本身的问题啊 ？？中间是Marker，两边是样品，上样样品10，Marker5

中间是Marker，两边是样品，上样样品10，Marker5
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17楼2011-10-23 22:09:20
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wxq999

新虫 (小有名气)
西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:51
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告，为了避免版主刷管理记录的嫌疑，不再每个帖子单独扣分，而是分几次重罚。请自重，勿扰乱论坛的正常交流！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:51 ]
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18楼2011-10-24 17:03:42
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hrjxx

新虫 (小有名气)
随时更新的哦实验进展啊，我昨天又提了次啊，浓度是3.8mg/ml，上样10ul,NI 你看看效果，给分析下啊，没有加硫脲，这次浓度提高是因为，裂解前，液氮研磨了下，且加了蛋白酶抑制剂（不知道是不是抑制降解的原因）， 不知道为啥高分子量蛋白依然依然很少，请大家分析下啊

液氮研磨溶解的带型（加蛋白酶抑制剂）



剪碎溶解的带型（仅加PMSF)
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19楼2011-10-25 11:17:22
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skyseaapple

铁虫 (小有名气)
LZ可以把裂解液直接拿来跑电泳，看看原来里面蛋白的情况，PMSF个人觉得问题不大，之前我做SDS-PAGE的时候，会跑一个全菌体，就是裂解之后不提取，直接电泳
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20楼2011-10-26 14:07:27
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