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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊

我是按照TCA/丙酮沉淀方法，提取总蛋白用来跑双向的，跑双向之前，先用SDS-PAGE,检测了下蛋白质量，但是看到这张图，我不知道该怎么办，请大家帮忙分析下啊，图上的右边3个，为蛋白样品，右边第4为Marker泳道
为什么我的蛋白样品，就中间一块有呢，高分子量和低分子量都是空白呢？？还有就是带很模糊，这是降解的原因吗？？请高手给指点下 啊。先谢谢了啊

总蛋白的检测胶图

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-17 at 19:26 ]
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1楼 2011-10-17 02:09:58
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skyseaapple

铁虫 (小有名气)
LZ可以把裂解液直接拿来跑电泳，看看原来里面蛋白的情况，PMSF个人觉得问题不大，之前我做SDS-PAGE的时候，会跑一个全菌体，就是裂解之后不提取，直接电泳
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20楼2011-10-26 14:07:27
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hrjxx

新虫 (小有名气)
为什么我的蛋白样品，就中间一块有呢，高分子量和低分子量都是空白呢？？还有就是带很模糊，这是降解的原因吗？？请高手给指点下 啊。先谢谢了啊
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2楼2011-10-17 02:11:25
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)
西瓜: 给点建议啊 2011-10-17 18:40:29
这电泳是看到的最烂的
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3楼2011-10-17 17:40:47
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求索寻觅

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励下 2011-10-17 19:27:18
hrjxx(金币+1): 谢谢啊 ，图是很烂，但是全蛋白应该分布在整个泳道，为什么就集中在中间快呢，谢谢你的建议，不过我想只能给你2分 2011-10-17 20:05:49
我觉得你你的胶没配好，mark一般跑的比较好的，你这mark的图谱都这么差，我只能推测是胶的问题了。你的ap是新配的吗？如果是，你跑胶时候的电压或者电流是多大呢？还有，mark点样时你注意的浓度了没？
我也做这个时间不是很长，但是我的一向SDS-PAGE效果比你的好些，楼主注意下操作吧。
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4楼2011-10-17 18:51:13
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