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SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
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用的菌液总单蛋白，考马斯亮蓝人染色几乎没有条带，所以就用了硝酸银染色，结果根本不成条带，完全是成弥散状的，整个泳道都是黑的，同时跑的Marker很正常，考马斯亮蓝染色的条带清晰。 我用这个总蛋白过完DEAE柱子后，因为蛋白含量很低，所以只能用硝酸银染色，染色后的条带还是比较清晰的 请教高人啊，实验没办法继续了！！ 补充：样品加入上样缓冲液后不是呈蓝色的而是黄色的。 [ Last edited by 五木凋零 on 2011-5-9 at 17:04 ] |
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2楼2011-05-09 17:13:36
HarveyWang
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【答案】应助回帖
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rainwander(EPI+1): 2011-05-09 21:57:28
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-05-09 21:57:35
rainwander(EPI+1): 2011-05-09 21:57:28
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-05-09 21:57:35
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【补充：样品加入上样缓冲液后不是呈蓝色的而是黄色的。】 这说明，你的样品根本就是呈酸性的。要加大电泳Buffer用量使之呈碱性蓝色。或者用 1M Tris Base加 几uL 到样品里调高pH 很可能是电泳都没有走进胶里面，因而考染没有颜色。蛋白太少了！ 银染怎样都会染色的，关键是时间长短，长时间整个胶都发黑。即使没有蛋白！ 而同时跑的marker 考染 正常，说明不是染色的问题。 最可能的解释：你的泳道里没有跑进蛋白。 |
3楼2011-05-09 18:49:46
4楼2011-05-09 21:15:51
5楼2011-05-10 12:47:08
6楼2011-05-13 23:04:02
