应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌总蛋白SDS-PAGE时菌体处理出现粘稠物？？
71/1返回列表
查看: 4097  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

youngsun50

木虫 (正式写手)

[交流] 细菌总蛋白SDS-PAGE时菌体处理出现粘稠物？？

如题，步骤为1ml菌体离心，沉淀加入了100ul的1*SDS凝胶加样缓冲液，100度煮4min,，12000g离心4min,结果没有沉淀出现，均有一坨粘稠物。
请问，各位虫友，这是什么原因？？ 另，有的说煮沸10min,请问煮沸过长对蛋白有影响吗，我的样品为肺炎克雷伯杆菌（G-菌）？
谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-08-26 16:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
youngsun50(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!很精辟的解答！ 2011-08-26 17:39:27
粘稠也是正常的，细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了，但一般离心之后还是有沉淀出来的，取上清上样。我们一般煮沸10min，煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-08-26 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
★
youngsun50(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-26 16:43:34:
粘稠也是正常的，细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了，但一般离心之后还是有沉淀出来的，取上清上样。我们一般煮沸10min，煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。

您好，我想请问一下，我今天做诱导，取500微升菌液，12000rpm离心1min，弃上清，用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer，然后100℃煮沸5min，12000rpm离心1min，然后取上清，20微升装一管，可是当我吸到最后的时候没有看到有沉淀啊？也没像楼上说的出现粘稠，是不是没裂解好啊？因为上样buffer颜色太深了，沉淀也不是特别容易观察，我想请问你们都能看到沉淀吗？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-26 17:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 17:53:03:
您好，我想请问一下，我今天做诱导，取500微升菌液，12000rpm离心1min，弃上清，用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer，然后100℃煮沸5min，12000rpm离心1min，然后取上清，20微升装一管，可是当我吸到最后 ...

正如你说的，沉淀不容易看到的。不黏稠和没看到沉淀不能代表没处理好。按照你的方法处理一般没问题的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-26 19:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-26 16:43:34:
粘稠也是正常的，细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了，但一般离心之后还是有沉淀出来的，取上清上样。我们一般煮沸10min，煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。

请问，那为什么一般情况没有粘稠物这情况呢，是不是我的菌过浓啊，另G-菌煮沸10min没问题吧？？
赞一下 回复此楼
5楼2011-08-26 22:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by youngsun50 at 2011-08-26 22:14:10:
请问，那为什么一般情况没有粘稠物这情况呢，是不是我的菌过浓啊，另G-菌煮沸10min没问题吧？？

粘稠跟菌的量、菌的种类都有关系的，不要纠结是否黏稠，把握一个原则：上样的时候尽量取上清。
我们经常使用的大肠杆菌也是典型的G-菌，煮沸10min都没问题的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-27 08:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-27 08:09:57:
粘稠跟菌的量、菌的种类都有关系的，不要纠结是否黏稠，把握一个原则：上样的时候尽量取上清。
我们经常使用的大肠杆菌也是典型的G-菌，煮沸10min都没问题的。

谢谢
回复此楼
7楼2011-08-27 09:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 youngsun50 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:11 by My20PsvIExYO
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 19/950 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:15 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭