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youngsun50

木虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 2640.6
帖子: 472
在线: 275.1小时
虫号: 852073

[交流] 细菌总蛋白SDS-PAGE时菌体处理出现粘稠物？？

如题，步骤为1ml菌体离心，沉淀加入了100ul的1*SDS凝胶加样缓冲液，100度煮4min,，12000g离心4min,结果没有沉淀出现，均有一坨粘稠物。
请问，各位虫友，这是什么原因？？另，有的说煮沸10min,请问煮沸过长对蛋白有影响吗，我的样品为肺炎克雷伯杆菌（G-菌）？
谢谢

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1楼 2011-08-26 16:06:01

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friya0910

新虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 19.4
帖子: 401
在线: 77.4小时
虫号: 1073675

★
youngsun50(金币+1):谢谢参与

引用回帖:

2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-26 16:43:34:
粘稠也是正常的，细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了，但一般离心之后还是有沉淀出来的，取上清上样。我们一般煮沸10min，煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。

您好，我想请问一下，我今天做诱导，取500微升菌液，12000rpm离心1min，弃上清，用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer，然后100℃煮沸5min，12000rpm离心1min，然后取上清，20微升装一管，可是当我吸到最后的时候没有看到有沉淀啊？也没像楼上说的出现粘稠，是不是没裂解好啊？因为上样buffer颜色太深了，沉淀也不是特别容易观察，我想请问你们都能看到沉淀吗？

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3楼2011-08-26 17:53:03

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
youngsun50(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!很精辟的解答！ 2011-08-26 17:39:27

粘稠也是正常的，细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了，但一般离心之后还是有沉淀出来的，取上清上样。我们一般煮沸10min，煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。

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2楼2011-08-26 16:43:34

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 17:53:03:
您好，我想请问一下，我今天做诱导，取500微升菌液，12000rpm离心1min，弃上清，用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer，然后100℃煮沸5min，12000rpm离心1min，然后取上清，20微升装一管，可是当我吸到最后 ...

正如你说的，沉淀不容易看到的。不黏稠和没看到沉淀不能代表没处理好。按照你的方法处理一般没问题的。

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4楼2011-08-26 19:43:24

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