24小时热门版块排行榜    

查看: 3926  |  回复: 6
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)


[交流] 细菌总蛋白SDS-PAGE时菌体处理出现粘稠物??

如题,步骤为1ml菌体离心,沉淀加入了100ul的1*SDS凝胶加样缓冲液,100度煮4min,,12000g离心4min,结果没有沉淀出现,均有一坨粘稠物。
请问,各位虫友,这是什么原因?? 另,有的说煮沸10min,请问煮沸过长对蛋白有影响吗,我的样品为肺炎克雷伯杆菌(G-菌)?
谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)


引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-27 08:09:57:
粘稠跟菌的量、菌的种类都有关系的,不要纠结是否黏稠,把握一个原则:上样的时候尽量取上清。
我们经常使用的大肠杆菌也是典型的G-菌,煮沸10min都没问题的。

谢谢
7楼2011-08-27 09:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
★ ★ ★ ★ ★ ★
youngsun50(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!很精辟的解答! 2011-08-26 17:39:27
粘稠也是正常的,细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了,但一般离心之后还是有沉淀出来的,取上清上样。我们一般煮沸10min,煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。
2楼2011-08-26 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)



youngsun50(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-26 16:43:34:
粘稠也是正常的,细胞煮沸之后核酸等物质都释放出来了,但一般离心之后还是有沉淀出来的,取上清上样。我们一般煮沸10min,煮沸过长对SDS-PAGE跑蛋白没有影响的。

您好,我想请问一下,我今天做诱导,取500微升菌液,12000rpm离心1min,弃上清,用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer,然后100℃煮沸5min,12000rpm离心1min,然后取上清,20微升装一管,可是当我吸到最后的时候没有看到有沉淀啊?也没像楼上说的出现粘稠,是不是没裂解好啊?因为上样buffer颜色太深了,沉淀也不是特别容易观察,我想请问你们都能看到沉淀吗?
3楼2011-08-26 17:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by friya0910 at 2011-08-26 17:53:03:
您好,我想请问一下,我今天做诱导,取500微升菌液,12000rpm离心1min,弃上清,用50微升灭菌水重悬后加50微升2×上样buffer,然后100℃煮沸5min,12000rpm离心1min,然后取上清,20微升装一管,可是当我吸到最后 ...

正如你说的,沉淀不容易看到的。不黏稠和没看到沉淀不能代表没处理好。按照你的方法处理一般没问题的。
4楼2011-08-26 19:43:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见