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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhougama

禁虫 (正式写手)

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newtime007

木虫 (正式写手)


看天(EPI+1): 2011-04-10 09:20:55
zhougama(金币+5): 感谢您的回帖! 2011-04-10 18:25:48
第一,估计你的胶漏了,根据你的结果这种可能性较大,重新做胶再试试
第二,胶的浓度,看看你的胶浓度是否适合于你的分子量,你用mark作对比,最好让胶浓度符合你的MARK能跑开,是你的目标分子在mark中间,看看情况如何
第三,考虑你的上样浓度,可以适当减少样品浓度。
2楼2011-04-10 07:01:13
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zhougama

禁虫 (正式写手)

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3楼2011-04-10 09:35:21
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wqj1988926

金虫 (正式写手)


看天(EPI+1): 2011-04-10 16:07:53
zhougama(金币+5): 感谢您的回帖! 2011-04-10 18:26:04
上样量可能偏大,我们一般是40左右,条带弥散有可能是样品处理有问题,比如加热时间温度太大,是蛋白多肽断裂
还有楼主用的是试剂盒是什么牌子的,最好用专业强的牌子,我以前遇到过这种问题,基本看不到条带,换了试剂盒就做好了
4楼2011-04-10 09:47:39
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★
看天(金币+3): 如果楼主对你的满意记得申请EPI 2011-04-10 13:15:23
看天(EPI+1): 2011-04-10 16:07:48
zhougama(金币+5): 感谢你的回帖! 2011-04-10 18:26:23
我考虑问题可能是:
第一,考虑上样量太大了,根据你的浓度和上样体积计算,你的每孔上样量为40mg,而不是40ug,不知道你用的是什么类型的电泳仪,适当减少上样量,或者可以做个梯度试试,看看结果如何。
第二,会不会样品的pH值偏酸?我之前做三氯醋酸沉淀蛋白进行电泳的时候出现过这样的问题的,试着调节一下pH试试,因为蛋白质在碱性条件下带复电,才能往正极电泳。
5楼2011-04-10 10:37:21
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zhougama(金币+10): 感谢你的回帖,我猜也可能是盐浓度的问题。 2011-04-12 10:15:14
纯化后的蛋白上样2~5ug,考马斯亮蓝染色能够看见很清晰的条带,楼主的上样量太大,弥散多与pH及高盐有关,楼主可降低上样量,注意下pH值,若样品盐浓度过高可先除盐后再电泳。
6楼2011-04-11 20:29:21
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sunnyseu

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-06-08 08:37:50
建议纯化之后进行脱盐。。。然后再电泳。。。而且你的上样量太高了。。。如果是10孔的胶。。蛋白浓度比较高的话。。。最多需要10微升的样品就可以了。。。如果15个孔的。。。最多4微升就好呢。。。
7楼2012-06-07 21:35:23
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