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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】SDS-PAGE电泳上样量
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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1楼 2011-04-09 22:53:23
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newtime007

木虫 (正式写手)
看天(EPI+1): 2011-04-10 09:20:55
zhougama(金币+5): 感谢您的回帖！ 2011-04-10 18:25:48
第一，估计你的胶漏了，根据你的结果这种可能性较大，重新做胶再试试
第二，胶的浓度，看看你的胶浓度是否适合于你的分子量，你用mark作对比，最好让胶浓度符合你的MARK能跑开，是你的目标分子在mark中间，看看情况如何
第三，考虑你的上样浓度，可以适当减少样品浓度。
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2楼2011-04-10 07:01:13
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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3楼2011-04-10 09:35:21
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
看天(EPI+1): 2011-04-10 16:07:53
zhougama(金币+5): 感谢您的回帖！ 2011-04-10 18:26:04
上样量可能偏大，我们一般是40左右，条带弥散有可能是样品处理有问题，比如加热时间温度太大，是蛋白多肽断裂
还有楼主用的是试剂盒是什么牌子的，最好用专业强的牌子，我以前遇到过这种问题，基本看不到条带，换了试剂盒就做好了
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4楼2011-04-10 09:47:39
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
看天(金币+3): 如果楼主对你的满意记得申请EPI 2011-04-10 13:15:23
看天(EPI+1): 2011-04-10 16:07:48
zhougama(金币+5): 感谢你的回帖！ 2011-04-10 18:26:23
我考虑问题可能是：
第一，考虑上样量太大了，根据你的浓度和上样体积计算，你的每孔上样量为40mg，而不是40ug，不知道你用的是什么类型的电泳仪，适当减少上样量，或者可以做个梯度试试，看看结果如何。
第二，会不会样品的pH值偏酸？我之前做三氯醋酸沉淀蛋白进行电泳的时候出现过这样的问题的，试着调节一下pH试试，因为蛋白质在碱性条件下带复电，才能往正极电泳。
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5楼2011-04-10 10:37:21
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zhougama(金币+10): 感谢你的回帖，我猜也可能是盐浓度的问题。 2011-04-12 10:15:14
纯化后的蛋白上样2~5ug，考马斯亮蓝染色能够看见很清晰的条带，楼主的上样量太大，弥散多与pH及高盐有关，楼主可降低上样量，注意下pH值，若样品盐浓度过高可先除盐后再电泳。
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6楼2011-04-11 20:29:21
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sunnyseu

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-06-08 08:37:50
建议纯化之后进行脱盐。。。然后再电泳。。。而且你的上样量太高了。。。如果是10孔的胶。。蛋白浓度比较高的话。。。最多需要10微升的样品就可以了。。。如果15个孔的。。。最多4微升就好呢。。。
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7楼2012-06-07 21:35:23
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