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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出带
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liby

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出带 已有22人参与

我的目的蛋白大概是43KDa,我用了10%的分离胶，用考马斯亮蓝染色一个半小时，脱色一晚上，结果没带，marker都没出来，样品是我测过有酶活的发酵液。这是什么原因，请教各位
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1楼 2010-07-03 09:12:25
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):high hand~ :tiger23: 2010-07-03 20:23:30
脱色时间太长
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2楼2010-07-03 10:26:18
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jiahaitao1016

金虫 (小有名气)
★
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染的时间不够吧，跑完胶加考马斯亮蓝后煮胶5min，然后脱色
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3楼2010-07-03 10:41:39
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-03 11:11:19
首先，我不认为是楼上说的对，染色时间够了。
我觉得是你的胶，或者电泳液出问题了，你看看SDS是不是加多了？这会让你的电泳跑得非常快，或者电泳液有问题，换新的。
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4楼2010-07-03 11:03:45
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-03 20:23:40
marker都没有，认真查找原因吧。
染色脱色感觉没多大问题，如有怀疑可以再染一次。
43KD也不太可能跑出去。再重复一次看看吧，注意细节。
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5楼2010-07-03 11:15:09
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yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-03 20:23:47
重新配一下丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺以及电泳缓冲液的浓缩液，电泳时间要控制好。
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专注、专心、专业
6楼2010-07-03 11:15:29
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-03 20:23:52
我觉得还是配胶的问题，染色脱色时间可以，正常配胶的话43kD估计也跑不出去，那就剩下配胶的问题了！
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I am not a hero , but I served with heroes！
7楼2010-07-03 11:32:33
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-03 20:24:04
明显是脱色时间太长了。。一般脱一个小时就差不多了。。。
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8楼2010-07-03 15:04:55
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
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为什么没有固定？
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9楼2010-07-05 16:28:06
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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试剂配制的原因么？
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10楼2010-07-05 16:34:00
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