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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问哪位高手用琼脂糖电泳跑过蛋白？
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魏慧芳

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问哪位高手用琼脂糖电泳跑过蛋白？

我用琼脂糖跑蛋白，条带总是拖尾，染色后条带前沿和加样槽之间形成蓝色的一片，长方形，这是为什么呢？还不像正常的拖尾，求高手指教！！！
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1楼 2012-02-08 21:51:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

rainblue007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-10 13:38:44
魏慧芳(金币+3): ★★★很有帮助 2012-02-10 14:07:46
本人跑过两年琼脂糖-蛋白电泳，这种情况，建议调整琼脂糖浓度，还有，电泳液不能加太多，刚刚没过胶面就行了。
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6楼2012-02-10 12:25:28
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lynni

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木(金币+3): 鼓励应助 2012-02-09 13:35:37
一般使用琼脂糖凝胶电泳的都是DNA，电泳驱动力靠的是DNA骨架本身的负电荷。蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。都是负电荷，所以这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时，可以考虑换用琼脂糖凝胶，因为该体系孔径大。出现上述情况，是不是因为蛋白不够大根本跑不开？~~
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淘喜欢的一切
2楼2012-02-09 00:16:08
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普通回帖

lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么蛋白要用琼脂糖凝胶电泳来跑呢，我们都是用的聚丙烯酰胺凝胶电泳，建议尝试一下
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
3楼2012-02-09 08:01:50
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hxwhu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木(金币+2): 鼓励应助哦 2012-02-10 13:38:29
样品要一样处理哦，加SDS加还原剂，缓冲液不能用TAE吧，要tris-glycine缓冲体系的，总之，感觉很怪，难道你不会做块垂直胶吗，琼脂糖胶那么厚，不好染不好脱
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4楼2012-02-09 13:54:17
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jingzhang08

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是你在研究蛋白DNA相互作用吗？可以把DNA跑在蛋白胶上看看，native胶～
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5楼2012-02-09 15:12:37
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魏慧芳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by rainblue007 at 2012-02-10 12:25:28:
本人跑过两年琼脂糖-蛋白电泳，这种情况，建议调整琼脂糖浓度，还有，电泳液不能加太多，刚刚没过胶面就行了。

太感谢了！我有一种蛋白，在pH8.6的时候，理论上应该带正电，跑向阴极，可我做的总是跑向阳极，实在想不出为什么？求指点！
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7楼2012-02-10 14:07:17
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rainblue007

金虫 (小有名气)
小丹木木(金币+3): 鼓励应助 2012-02-16 13:33:46
引用回帖:
7楼: Originally posted by 魏慧芳 at 2012-02-10 14:07:17:
太感谢了！我有一种蛋白，在pH8.6的时候，理论上应该带正电，跑向阴极，可我做的总是跑向阳极，实在想不出为什么？求指点！

琼脂糖-蛋白电泳，如果需要样品带负电，处理时也会加一定量的SDS。像你这种情况，需要的是样品带正电，那就千万不能加SDS，或者有类似功能的试剂，你好好检查一下你的上样缓冲液、电泳缓冲液成分的和pH，需要严格控制，有条件的话一定要用准确度高的pH计，pH试纸就算了，太不准了。祝好运！
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8楼2012-02-16 09:39:08
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wang_zhen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 魏慧芳 at 2012-02-10 14:07:17
太感谢了！我有一种蛋白，在pH8.6的时候，理论上应该带正电，跑向阴极，可我做的总是跑向阳极，实在想不出为什么？求指点！...

请问如果带正电的蛋白，留在胶孔没有跑动，是怎么回事呢？上样缓冲用的是溴酚蓝
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9楼2013-05-23 10:58:13
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
楼主用琼脂糖跑蛋白，条带总是拖尾，染色后条带前沿和加样槽之间形成蓝色的一片，长方形，这是为什么呢？

拖尾现象经常是电泳，最常常是由于样品点样量过多和溶解不完全引起的。可以通过加样前对样品离心来解决，选用合适的样品缓冲溶液和凝胶缓冲溶液可以用来改进样品溶解的效果。
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10楼2015-06-10 12:27:16
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