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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】怎么样跑琼脂糖凝胶电泳 能将250bp 和290 bp的片段分离
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎么样跑琼脂糖凝胶电泳 能将250bp 和290 bp的片段分离

胶的浓度该多大？ 电压多少？ 跑多长时间？
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1楼2011-04-03 00:18:52
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小燕子包谷

金虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
这个得根据你的具体仪器条件
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2楼2011-04-03 01:00:47
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
试试3%或者4%的胶，注意溴酚蓝的指示大小约370BP左右，跑得差不多别跑出去了就行了呗。
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3楼2011-04-03 09:10:34
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-04-03 20:01:13
可以跑到2-3%的胶，注意溴酚蓝跑到三分之二偏外的部位应该可以分开的
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4楼2011-04-03 09:29:15
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龙游天下

禁虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2011-04-03 09:38:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
这个确实还有点难啊。。。。
你的marker必须小一点！你这两条带才相差40bp！
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7楼2011-04-03 10:11:04
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hwlightning

铜虫 (初入文坛)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
4%的胶
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8楼2011-04-03 13:36:10
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小燕子包谷 at 2011-04-03 01:00:47:
这个得根据你的具体仪器条件

仪器不就是电泳仪吗
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9楼2011-04-03 14:38:23
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-03 10:11:04:
这个确实还有点难啊。。。。
你的marker必须小一点！你这两条带才相差40bp！

电压为多少呢
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10楼2011-04-03 14:38:44
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tangbohejin at 2011-04-03 09:45:29:
支持---

电压多少合适？
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11楼2011-04-03 14:39:09
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天使托

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-04-03 14:38:44:
电压为多少呢

这个你得跑聚丙烯电泳了，电压正常即可！
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12楼2011-04-03 14:52:52
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yingbin2010

金虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
不是很懂，顶
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14楼2011-04-03 15:10:26
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
完全可以，30bp的碱基差距足以能够分开，因为我用3%的琼脂糖都分开了23bp 12bp 14bp的片段插入缺失，跑胶时间40min左右，倒胶快点
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15楼2011-04-03 15:16:22
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tangyanxmc

金虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
顶起
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16楼2011-04-03 15:20:50
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vs570588

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
可以用ladder 50 marker, 就是marker各条带之间差50bp, 不过胶浓度要配成2-3%，时间一般30min即可，电压120左右。
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17楼2011-04-03 18:36:31
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yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
1.5%的胶 marker1~~~
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18楼2011-04-03 20:32:22
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dreaming0816

金虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
凝胶的浓度大一些，跑的时候电流小一些，时间长一些。。。
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19楼2011-04-03 21:35:27
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-03 15:16:22:
完全可以，30bp的碱基差距足以能够分开，因为我用3%的琼脂糖都分开了23bp 12bp 14bp的片段插入缺失，跑胶时间40min左右，倒胶快点

这么牛
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20楼2011-04-04 11:29:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
没问题，2%及以上的琼脂糖胶，电压控制小于5V/cm，跑1.5hr，即可。 marker可以用50bp ladder(invitrogen)
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21楼2011-04-06 18:19:46
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nininini

银虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
3%的胶足够了~~我的十几个bp都能分开了，把时间延长一点儿就行
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22楼2011-04-06 18:43:45
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-03 15:16:22:
完全可以，30bp的碱基差距足以能够分开，因为我用3%的琼脂糖都分开了23bp 12bp 14bp的片段插入缺失，跑胶时间40min左右，倒胶快点

佩服，这都行。能否介绍一下你用的是啥缓冲液，是几×的缓冲液，多大的电压。 哪个公司的琼脂糖。 我也跑了不少的琼脂糖，也就是差30个bp差异可以分开。 谢谢。
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23楼2011-04-06 18:47:37
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
胶尽量配成低浓度的，到模的时候倒块长形胶，多跑会，也是80的电压
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24楼2011-04-06 20:14:47
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-04-06 20:14:47:
胶尽量配成低浓度的，到模的时候倒块长形胶，多跑会，也是80的电压

低浓度能将200bp 左右的片段分开吗?
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25楼2011-04-09 16:44:07
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-04-06 18:43:45:
3%的胶足够了~~我的十几个bp都能分开了，把时间延长一点儿就行

电压多大？
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26楼2011-04-09 16:45:42
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nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-09 16:45:42:
电压多大？

100V ，30分钟就能分开了
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27楼2011-04-09 17:10:20
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无风的小屋

金虫 (小有名气)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
用琼脂糖应该能跑开啊，实在不行的话，就跑PAGE吧。
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28楼2011-04-09 19:27:11
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yucheng9255 at 2011-04-09 16:44:07:
低浓度能将200bp 左右的片段分开吗?

应该可以的
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29楼2011-04-09 20:55:20
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tangbohejin6楼
2011-04-03 09:45   回复  
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-04-03 09:10:34: 试试3%或者4%的胶，注意溴酚蓝的指示大小约370BP左右，跑得差不多别跑出去了就行了呗。

支持---
yyp_12313楼
2011-04-03 15:09   回复  
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