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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳，跑的条带有点难看
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳，跑的条带有点难看

这个是我酶切之后跑的电泳图，除了Marker和一个PCR的产物跑的条带是直线型的，怎么其他酶切的都好像跑的稍微有点快了？？呈现那种所谓的微笑状，请各位虫虫帮忙分析一下原因。缓冲液？胶？还是本身质粒没有提好？？？
底下的小片段是目的条带，大小应该和PCR的产物是一样的大小，但是从图片上看的话就是要小一些。
之前因为RNA酶的问题，所以最近的几次提质粒都没有进行消化，图片有点难看，望各位见谅！！
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1楼2011-08-13 19:09:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

1949stone: 恐怕不是 2011-08-13 20:14:17
yesucao(金币+1): 2011-08-13 22:47:10
微笑型条带是因为凝胶不均匀导致的哦，你看看是否药品失效，如凝胶催化剂，或者是你实验室温度太低了
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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
2楼2011-08-13 19:33:00
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good 2011-08-14 09:06:46
西瓜(MolEPI+1): 补上 2011-08-14 09:07:12
yesucao(金币+5): 恩，你的建议我会认真采纳的 2011-08-14 09:43:43
原因分析：
1、胶不匀称。胶不匀称自然就要出现不规则图形。但从上图看N多都是月牙形，所以我感觉不大可能是胶不匀称。
2、电压不稳。电压不稳，会对质粒的牵引力发生扭曲。自然也要不规则。可以加大电压解决问题。或者换新缓冲液。一般是以正负极距离为准。1cm为5个电压。跑胶不超过1h。
建议，把跑胶的槽子等，全部清洗干净，烘干。换新的缓冲液，加电压120V以上，50min。
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9楼2011-08-13 22:57:44
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 19:33:00:
微笑型条带是因为凝胶不均匀导致的哦，你看看是否药品失效，如凝胶催化剂，或者是你实验室温度太低了

如果按你所说的话，那除了PCR的产物，Marker，还有一个酶切的也是挺好的，只有最上面的一条带，也是直线型的，是否可以排除凝胶不均匀的情况？？？
凝胶的时间在30-40min。
实验室的小槽子坏了，我用的是28cm的大槽子，电压只能在75左右，电流在100mA，跑了1.5h，这个是否会成为可能的潜在因素？？？
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3楼2011-08-13 20:25:20
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, MolEPI+1): 鼓励应助 2011-08-13 21:29:51
yesucao(金币+4): 说的有道理，今后我会注意的 2011-08-13 22:49:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesucao at 2011-08-13 20:25:20:
如果按你所说的话，那除了PCR的产物，Marker，还有一个酶切的也是挺好的，只有最上面的一条带，也是直线型的，是否可以排除凝胶不均匀的情况？？？
凝胶的时间在30-40min。
实验室的小槽子坏了，我用的是28cm的 ...

按理你其他都不会，那与电压也无关啊，要是电压有关系，全都这样了，这个更说不过去，不过你的电压也太小了，一般要在120以上，150以下会比较好。
我看你基本都是笑脸，这个与样品基本上没关系了，我还是认为与配胶有关。
另外，你拔梳子时也要注意，如果加样孔不规整，或梳子不干净引入了脏东西也是有可能的，你可以把梳子洗干净些，然后拔时快点，毕竟是DNA电泳，胶不平整我觉得很正常，如SDS电泳竖直的，有卡板，就比较少见。
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4楼2011-08-13 20:41:57
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

yesucao(金币+1): 2011-08-13 22:49:55
不然你可以试试，多让它凝固一段时间试试，凝它一个小时，还可以看看是不是催化剂失效了，尽量要放在干燥器中，催化剂失效凝固时间就会延长，就可能导致胶不均匀，因为两边是槽与槽的边界，自然跑得慢，中间如果尚未完全凝固自然就快了。
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5楼2011-08-13 20:46:30
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yesucao(金币+1): 2011-08-13 23:00:44
两个Marker ? Marker 正常，换用75的电压应该影响不大，可能还是酶切的问题，酶切不完全？
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
6楼2011-08-13 20:52:48
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 20:41:57:
按理你其他都不会，那与电压也无关啊，要是电压有关系，全都这样了，这个更说不过去，不过你的电压也太小了，一般要在120以上，150以下会比较好。
我看你基本都是笑脸，这个与样品基本上没关系了，我还是认为与 ...

实验室的小槽子都坏了，暂时是在大的电泳槽中跑的（宽28cm左右），只做了一个5cm左右的小胶，因为是借用别人的槽子，与变压器不是很配套，电压最高也只能上升到75左右，之前一段时间用小槽子跑的时候也没出现过这种问题
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7楼2011-08-13 22:54:20
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 20:46:30:
不然你可以试试，多让它凝固一段时间试试，凝它一个小时，还可以看看是不是催化剂失效了，尽量要放在干燥器中，催化剂失效凝固时间就会延长，就可能导致胶不均匀，因为两边是槽与槽的边界，自然跑得慢，中间如果尚 ...

催化剂是什么东东？？
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8楼2011-08-13 22:55:59
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 20:46:30:
不然你可以试试，多让它凝固一段时间试试，凝它一个小时，还可以看看是不是催化剂失效了，尽量要放在干燥器中，催化剂失效凝固时间就会延长，就可能导致胶不均匀，因为两边是槽与槽的边界，自然跑得慢，中间如果尚 ...

这段时间跑其他的时候也出现过，一块小胶，中间的跑的还可以 ，拖尾的不厉害，两头的就拖得很长，最近发现的这个问题。
以后会注意的，尽量让胶凝固的时间延长
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10楼2011-08-13 23:00:21
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