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wyf625356

铁虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳后发现目的条带偏大是什么原因 已有1人参与

最近在做易错PCR,但是PCR后电泳有偏大约100bp,我的目的基因为1100bp,但是从胶图中可以看到这个应该有1200bp了,这是什么情况,希望高手指点,开始怀疑是离子浓度的影响,但是纯化后也是相同的情况
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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wyf625356: 金币+2, 有帮助 2012-12-05 12:58:24
你可以测序看看,我这次做克隆,目的片段是1300,回收的时候也是,可是连入T载体以后,然后菌批,不知怎么回事就是1000左右,但是拿出去测序,是对着的
2楼2012-12-04 21:53:33
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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wyf625356: 金币+1, 有帮助 2012-12-05 12:58:34
我也出现过这种情况,我的片段大约为1500,跑出的胶却在1700左右,但测序结果是对的
3楼2012-12-04 22:12:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wyf625356: 金币+1, 有帮助 2012-12-05 12:58:51
胶上看分子量不完全准确,这种情况时有发生。测序正确就可以了。
4楼2012-12-05 08:01:45
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minlei219

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
wyf625356: 金币+1, 有帮助 2012-12-05 12:59:00
本帖内容被屏蔽

5楼2012-12-05 11:01:06
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seanzhu1996

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶电泳分析只能定性,不一定非常准确,尤其是条带的大小判断,主要还是要测序以及酶切才能检验结果。
享受每天的生活
6楼2012-12-05 15:43:32
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上演空城计

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以适当增加电压和延长跑胶的时间试试,希望对你有帮助
不努力你连空城都得不到
7楼2014-12-06 22:54:13
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