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yinhuanshun

至尊木虫 (知名作家)

[求助] DNA琼脂糖凝胶电泳所需DNA的最低浓度

我是学化学的
最近在做一点生物的实验
请问一下
如果跑DNA琼脂糖凝胶电泳，一般情况下，需要DNA的浓度至少要多少，才能跑出条带啊？浓度最好是mol/L，我们化学都这样用的。
另外，如果跑完娇后，照相时，发现点样孔很亮，是怎么回事啊？
谢谢
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你可能貌不惊人，但不必耿耿于怀；你可能前途坎坷，但不必垂头丧气；欣赏自己，坚定自信，尽力走自己的路，人生就无怨无悔。
1楼 2012-04-21 18:12:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3 2012-04-22 14:18:15
yinhuanshun: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-04-22 16:01:55
琼脂糖凝胶电泳通常用溴化乙锭（EB）染色，估计你们也是吧。EB配成10mg/mL，使用时琼脂糖凝胶里面的浓度是0.5ug/mL。染色的效果跟DNA的量有关，按照前述使用EB来染色的话，能检测到最低10ng的DNA条带。这里的单位用的是质量单位ng哦。

点样孔很亮，可能是有蛋白质吧。上图看才好分析。
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2楼2012-04-21 21:46:06
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yinhuanshun: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-04-22 16:02:05
楼上已经说的很清楚了，不过胶的浓度可以变得，用1ug/mL的好点，浓度太小了胶不好操作，容易破裂，如果你像得到好的图片，你可以在加大胶的浓度，检测浓度的最低值差不多就是楼上说的，你可以根据Marker的亮度来粗略估算一下，marker一般是75ng/5ul 的浓度
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我努力我奋斗我成功
3楼2012-04-22 10:52:24
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-22 10:52:24:
楼上已经说的很清楚了，不过胶的浓度可以变得，用1ug/mL的好点，浓度太小了胶不好操作，容易破裂，如果你像得到好的图片，你可以在加大胶的浓度，检测浓度的最低值差不多就是楼上说的，你可以根据Marker的亮度来粗 ...

额，我前面说的0.5ug/mL是指EB浓度，表述不清了……
琼脂糖凝胶的浓度一般从0.5%到~2都可以，1%最常用，这里单位是g/100mL。1%就是1克琼脂糖加到100mL电泳缓冲液里。这种表述很别扭，不过大家都这么用……
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4楼2012-04-22 18:56:23
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-04-23 18:33:35
本帖仅楼主可见
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5楼2012-04-23 12:41:56
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andyleier

铁虫 (初入文坛)
我们实验室平常做的时候，琼脂糖凝胶的浓度是1%，点样量为2ul。条带太亮，是因为杂质太多，可能是蛋白质和RNA没清洗干净。
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6楼2012-07-05 09:53:40
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杜仲谷

木虫 (职业作家)

金虫
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-22 18:56:23
额，我前面说的0.5ug/mL是指EB浓度，表述不清了……
琼脂糖凝胶的浓度一般从0.5%到~2都可以，1%最常用，这里单位是g/100mL。1%就是1克琼脂糖加到100mL电泳缓冲液里。这种表述很别扭，不过大家都这么用……...

您是不是说错了？单位是g/mL吧？！
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从事分生的药学生
7楼2014-11-27 16:38:34
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