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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶DNA回收
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fyw921

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶DNA回收

虫虫们！请问琼脂糖凝胶电泳后回收DNA后检测OD260/OD280=2.2并且检测曲线在260nm处无峰是一条一直降低的曲线，请问在回收过程中可能出现什么问题用的是试剂盒步骤按照说明书进行！
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1楼 2012-07-17 21:34:12
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123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:55:53
LZ:首先，测DNA的时候，请不要相信机器的数据，建议跑个胶看看，这样会非常准确！ 回收的时候，将融好的胶倒入管中，应静置几分钟，保证DNA吸附到管子上！！哈哈~~~
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2楼2012-07-18 10:23:20
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:56:01
fyw921: 金币+1, ★有帮助 2012-07-20 12:57:02
纯DNA其OD260/OD280应在1.6-1.8之间，低于此范围说明蛋白含量超标，高于此范围说明样品中含有RNA，所以，楼主虽然是按照试剂盒步骤按照说明书进行操作的，那你有没有在溶液1中加没加RNA酶(这点很重要)。望楼主在仔细检查一下，也许问题就出在这里。祝楼主好运。
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只要功夫深铁杵磨成针
3楼2012-07-18 10:23:21
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-18 13:56:12
fyw921: 金币+1, ★有帮助 2012-07-20 12:56:57
你的比值太高了，跑胶应该会看到下面弥散的一坨。一般纯的DNA的比值是在1.85左右的，1.9以上就是RNA偏高，1.7一下就是含有很多的蛋白质。

你说是DNA切胶回收，应该不存在P1里面没加RNA酶的问题。
感觉上应该是你操作上得问题。融胶的时候要彻底溶解，然后等到液体降至室温后再加到柱子上去。最后洗脱的时候用60多度的水，洗脱两遍。
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4楼2012-07-18 12:04:02
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yjqhades

禁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
fyw921: 金币+1, ★有帮助 2012-07-20 12:56:49
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-18 15:42:33
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fyw921

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 123n at 2012-07-18 10:23:20
LZ:首先，测DNA的时候，请不要相信机器的数据，建议跑个胶看看，这样会非常准确！ 回收的时候，将融好的胶倒入管中，应静置几分钟，保证DNA吸附到管子上！！哈哈~~~

thank U!
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6楼2012-07-20 12:55:54
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110150298

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题：胶回收PCR产物时OD260/OD280偏高，有一个达到了3点几，电泳检测时条带很单一，用同一台仪器测质粒的纯度时没有超过2.0。两个实验是同时进行的，试剂盒也是同一个公司的。
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7楼2012-11-23 16:07:46
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