应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR结果不好，胶回收后浓度很低
111/2返回列表12下一页
查看: 4900  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

anmengdy

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果不好，胶回收后浓度很低 已有2人参与

最近在做分子实验，好多东西不清楚，我们实验室之前做化学的，所以也没师兄师姐，老师可以问。
跑了PCR，好像引物二聚体比较严重，拖带，条带不够亮，胶回收之后浓度别低，想问问大家出了什么问题，怎么解决！

PCR结果不好，胶回收后浓度很低
sulII.gif


PCR结果不好，胶回收后浓度很低-1
tetW.gif
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-13 12:05:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

apety

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
anmengdy: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-13 15:13:22
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-13 19:00:01
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时候，5min左右就可以，关键看胶有没有完全融化4、点样时速度要快，要不然样品会弥散的（一般不会。。。除非你点很久）5、提醒你注意一下。。。你跑胶的时间有点长，或者说胶浓度太低，条带最好在胶中间，你的条带都快跑到最下面去了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-13 12:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-03-13 14:31:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by apety at 2014-03-13 12:28:24
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时 ...

我没有做对照，回收的时候是大孔，第二图很亮的是引物二聚体，目的条带很浅，不知道怎么改进，因为目的基因比较小，一百多bp,用的是1.5%的胶，所以有点跑出去了，跑太短时间mark跑不开。回收可能融化时间过长了（10min,60℃)
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-13 15:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 14:31:49
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。

明白了，多谢！
回复此楼
5楼2014-03-13 15:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by apety at 2014-03-13 12:28:24
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时 ...

我没有做对照，回收的时候用的是大孔，胶融化可能融化有点长（10min,60℃),用的是1.5%的胶，目的基因有点小，所以跑的比较下面，时间太短了好像mark跑不开。第二个图亮的那个是引物二聚体，目的条带很浅的，不知道要怎么改进！
多谢了！
赞一下 回复此楼
6楼2014-03-13 15:10:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-13 19:00:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by anmengdy at 2014-03-13 15:10:06
我没有做对照，回收的时候用的是大孔，胶融化可能融化有点长（10min,60℃),用的是1.5%的胶，目的基因有点小，所以跑的比较下面，时间太短了好像mark跑不开。第二个图亮的那个是引物二聚体，目的条带很浅的，不知道 ...

1%的胶，90V，30min取出看看，不行接着跑。目的基因有150，不宜长时间电泳。
赞一下 回复此楼
7楼2014-03-13 15:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 15:39:24
1%的胶，90V，30min取出看看，不行接着跑。目的基因有150，不宜长时间电泳。...

好的，等下试下！
回复此楼
8楼2014-03-13 16:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 14:31:49
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。

胶回收前非常的亮，而且已经多扩了两管了，但是回收之后浓度还是很低，怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-17 16:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by anmengdy at 2014-03-17 16:54:01
胶回收前非常的亮，而且已经多扩了两管了，但是回收之后浓度还是很低，怎么回事呢？...

你的浓度时多少？我回收后是十几纳克每微升，我这个值是不是也是比较低了？第一次做分子这些实验，不太懂
赞一下 回复此楼
10楼2014-04-10 10:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anmengdy 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭