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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR结果不好，胶回收后浓度很低
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anmengdy

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果不好，胶回收后浓度很低 已有2人参与

最近在做分子实验，好多东西不清楚，我们实验室之前做化学的，所以也没师兄师姐，老师可以问。
跑了PCR，好像引物二聚体比较严重，拖带，条带不够亮，胶回收之后浓度别低，想问问大家出了什么问题，怎么解决！

PCR结果不好，胶回收后浓度很低
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PCR结果不好，胶回收后浓度很低-1
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1楼 2014-03-13 12:05:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

apety

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
anmengdy: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-13 15:13:22
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-13 19:00:01
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时候，5min左右就可以，关键看胶有没有完全融化4、点样时速度要快，要不然样品会弥散的（一般不会。。。除非你点很久）5、提醒你注意一下。。。你跑胶的时间有点长，或者说胶浓度太低，条带最好在胶中间，你的条带都快跑到最下面去了
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2楼2014-03-13 12:28:24
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。
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3楼2014-03-13 14:31:49
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普通回帖

anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by apety at 2014-03-13 12:28:24
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时 ...

我没有做对照，回收的时候是大孔，第二图很亮的是引物二聚体，目的条带很浅，不知道怎么改进，因为目的基因比较小，一百多bp,用的是1.5%的胶，所以有点跑出去了，跑太短时间mark跑不开。回收可能融化时间过长了（10min,60℃)
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4楼2014-03-13 15:01:15
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anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 14:31:49
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。

明白了，多谢！
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5楼2014-03-13 15:05:35
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anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by apety at 2014-03-13 12:28:24
我的问题：1、你的对照组是哪个？2、胶回收的时候要用大孔点样，如果你是用的第一个图切胶回收，那果断浓度低。3、试剂盒的操作步骤有误，切胶后溶胶时要轻微震荡，不要试剂盒上说多少分钟就多少分钟，一般55℃的时 ...

我没有做对照，回收的时候用的是大孔，胶融化可能融化有点长（10min,60℃),用的是1.5%的胶，目的基因有点小，所以跑的比较下面，时间太短了好像mark跑不开。第二个图亮的那个是引物二聚体，目的条带很浅的，不知道要怎么改进！
多谢了！
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6楼2014-03-13 15:10:06
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-13 19:00:51
引用回帖:
6楼: Originally posted by anmengdy at 2014-03-13 15:10:06
我没有做对照，回收的时候用的是大孔，胶融化可能融化有点长（10min,60℃),用的是1.5%的胶，目的基因有点小，所以跑的比较下面，时间太短了好像mark跑不开。第二个图亮的那个是引物二聚体，目的条带很浅的，不知道 ...

1%的胶，90V，30min取出看看，不行接着跑。目的基因有150，不宜长时间电泳。
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7楼2014-03-13 15:39:24
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anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 15:39:24
1%的胶，90V，30min取出看看，不行接着跑。目的基因有150，不宜长时间电泳。...

好的，等下试下！
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8楼2014-03-13 16:14:49
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anmengdy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-13 14:31:49
胶回收之后浓度别低，可以多扩几管回收。

胶回收前非常的亮，而且已经多扩了两管了，但是回收之后浓度还是很低，怎么回事呢？
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9楼2014-03-17 16:54:01
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by anmengdy at 2014-03-17 16:54:01
胶回收前非常的亮，而且已经多扩了两管了，但是回收之后浓度还是很低，怎么回事呢？...

你的浓度时多少？我回收后是十几纳克每微升，我这个值是不是也是比较低了？第一次做分子这些实验，不太懂
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10楼2014-04-10 10:48:10
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