应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物平末端化问题
61/1返回列表
查看: 3988  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR产物平末端化问题 已有2人参与

我要做PCR产物和载体一个平末端一个粘性末端的连接，先将PCR产物用T4 DNA聚合酶削去A尾，然后再用另一个内切酶切割，实现一个平端一个粘性末端，现在有一个问题是T4 DNA聚合酶处理平端之后还要不要胶回收再用另一个内切酶切割，如果胶回收的话可能浓度就很低了，因为实验中一共进行好几次回收，如果不回收的话又怕前一步的反应影响后续实验，大家有没有做过的？给个建议
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-06 11:24:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-06 22:10:17
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-08 20:17:46
要先胶回收再用另一个内切酶切割，否则影响活力或者导致星号活力；还有一个方法就是直接PCR cleanup 回收然后用另一个内切酶酶切处理，方便，但是也会影响收率。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-06 11:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-06 11:37:54
要先胶回收再用另一个内切酶切割，否则影响活力或者导致星号活力；还有一个方法就是直接PCR cleanup 回收然后用另一个内切酶酶切处理，方便，但是也会影响收率。

您好，请教个问题，我提取的质粒做了一个单酶切，但是没有完全切开，还存在部分非线性的质粒，但我后续实验需要的是线性的，按理说应该要电泳切胶回收，但是因为我的载体比较大，回收效率低，所以想着能不能先将酶切的质粒电泳，之后将目的条带切下来，然后加入酚氯仿抽提乙醇沉淀？这种效果好不好
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-08 15:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-26 09:50:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-10-08 15:55:53
您好，请教个问题，我提取的质粒做了一个单酶切，但是没有完全切开，还存在部分非线性的质粒，但我后续实验需要的是线性的，按理说应该要电泳切胶回收，但是因为我的载体比较大，回收效率低，所以想着能不能先将酶 ...

可以的，酚氯仿抽提乙醇沉淀回收DNA效果也挺好的，注意少切点胶，沉淀的时候-80或-20度低温处理。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-09 15:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-26 09:50:55
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-25 18:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shining22

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2018-03-23 21:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 574759350 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:41 by Linda Hu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭