| 查看: 3437 | 回复: 21 | ||
蓝慧木虫 (正式写手)
|
[求助]
平末端连接不上，求助
|
| 大家好，本人最近在做平末端连接，我的PCR产物是混合引物PCR结果，用的是东洋纺的KOD-PLUS-NEO酶，PCR产物用OMEGA胶回收试剂盒进行回收，30微升体积稀释，回收后电泳检测有特异单一条带，浓度大约为150ng/ul，目的片段大小约为1500bp。接着进行连接，用的载体是全式金pEASY-blunt zero clonig KIT,连接体系5微升，包括2微升PCR产物，1微升载体，25度15min,之后50微升感受态转化，涂板，过夜培养，其中培养基为LB。培养后挑选白色菌落摇菌4小时M13引物菌液检测，可是PCR检测只有在100以下有个带，完全没有目的带，已经做了3次都是如此。现在都不知道是什么问题，请求各位虫子指点迷津，不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有293人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶切位点不同，构建载体
已经有9人回复
- 平端 影响连接吗
已经有8人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 平末端连接做不出来克隆
已经有30人回复
- 虚心请教关于平—粘末端的连接问题
已经有18人回复
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端补平
已经有4人回复
- 谁做过pEASY-Blunt Cloning啊？谁做过平末端连接啊？
已经有7人回复
- 为什么连接这么难呢？
已经有54人回复
- 【求助/交流】求平末端的连接体系！
已经有5人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
已经有23人回复
- 求助笔记本无线网络显示连接好了且信号很好但打不开网页
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】重叠PCR的问题???
已经有7人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】粘性末端连接问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】平末端必须去磷酸化吗
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于平末端连接
已经有25人回复
- 【求助/交流】单酶切连接的克隆急……
已经有10人回复
- 【求助】观看PPS或者用迅雷下载，不久宽带连接就会自动断开，之后就再连不上了
已经有4人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-12-19 12:10:01
蓝慧
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2721.8
- 散金: 13
- 红花: 1
- 帖子: 387
- 在线: 173.2小时
- 虫号: 1275376
- 注册: 2011-04-23
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
3楼2012-12-19 12:32:31
4楼2012-12-19 16:26:47
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
5楼2012-12-19 17:19:46
蓝慧
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2721.8
- 散金: 13
- 红花: 1
- 帖子: 387
- 在线: 173.2小时
- 虫号: 1275376
- 注册: 2011-04-23
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
6楼2012-12-19 19:09:13
蓝慧
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2721.8
- 散金: 13
- 红花: 1
- 帖子: 387
- 在线: 173.2小时
- 虫号: 1275376
- 注册: 2011-04-23
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
7楼2012-12-19 19:32:05
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
8楼2012-12-19 20:41:43
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
9楼2012-12-20 08:50:35
蓝慧
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2721.8
- 散金: 13
- 红花: 1
- 帖子: 387
- 在线: 173.2小时
- 虫号: 1275376
- 注册: 2011-04-23
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
10楼2012-12-20 09:01:23
50