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蓝慧木虫 (正式写手)
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[求助]
平末端连接不上，求助
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| 大家好，本人最近在做平末端连接，我的PCR产物是混合引物PCR结果，用的是东洋纺的KOD-PLUS-NEO酶，PCR产物用OMEGA胶回收试剂盒进行回收，30微升体积稀释，回收后电泳检测有特异单一条带，浓度大约为150ng/ul，目的片段大小约为1500bp。接着进行连接，用的载体是全式金pEASY-blunt zero clonig KIT,连接体系5微升，包括2微升PCR产物，1微升载体，25度15min,之后50微升感受态转化，涂板，过夜培养，其中培养基为LB。培养后挑选白色菌落摇菌4小时M13引物菌液检测，可是PCR检测只有在100以下有个带，完全没有目的带，已经做了3次都是如此。现在都不知道是什么问题，请求各位虫子指点迷津，不胜感激！ |
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