| 查看: 4784 | 回复: 4 | ||
[求助]
【求助/交流】酶切后的粘性末端补平
|
|
最近在改造载体，想先将基础载体酶切，得到粘性末端，然后用takara的dna blunting kit补平，再进行平端的连接。做了一次，没有筛到阳性克隆。请问大家有blunting的经验吗？ 还有，我可不可以将高保真酶和酶切回收产物72度共浴，从而利用高保真酶的3‘-5’外切酶活性把粘性末端切平呀？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有194人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于xba I单酶切后的TA连接
已经有7人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- DNA片段经过酶切后的粘性末端怎么磨平？
已经有15人回复
- 外切核酸酶(校正)活性是什么意思
已经有4人回复
- 【求助/交流】T-DNA全长约10000bp能否转入植物基因组。
已经有22人回复
- 【求助/交流】T4 DNA聚合酶怎么用？
已经有3人回复
- 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】粘性末端连接问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2011-08-08 12:15:44
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
sipin210(金币+1): thx~很有用，很多想法我都会试试看能不能成功~ 2011-08-09 10:08:09
|
lz是那端突出，你考虑用哪种酶不仅仅要考虑是否有活性，还要考虑活性的大小，不同酶的外切酶活性有的是针对粘端，有的是针对平端，有的甚至内凹也能切～～～ lz关于自连可以看看这个 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2941363 |
3楼2011-08-09 09:25:04
shaquila
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 1484.8
- 散金: 59
- 红花: 14
- 帖子: 553
- 在线: 182.3小时
- 虫号: 654839
- 注册: 2008-11-15
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2011-08-09 13:43:32
5楼2011-08-12 11:06:28
50