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sdwq

木虫 (正式写手)

[求助] 外切核酸酶(校正)活性是什么意思

"Klenow Fragment是DNA Polymerase I (大肠杆菌)的大片段。该酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切核酸酶(校正)活性,但是缺乏DNA polymerase I所具有的5’→3’外切核酸酶活性。"
3’→5’外切核酸酶(校正)活性是什么意思?
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

能够校正扩增产物3′末端的错配碱基
2楼2011-06-07 12:17:47
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sdwq

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-06-07 12:17:47:
能够校正扩增产物3′末端的错配碱基

如果3‘端是单链的话,Klenow聚合酶能将3’端的单链外切掉吗?也就是说,在Klenow存在的情况下,3‘端能以单链形式存在吗?
3楼2011-06-07 12:50:55
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励发帖交流 2011-06-07 20:34:42
sdwq(金币+5): 很详细,谢谢! 2011-06-08 08:21:13
据我的了解
Klenow片段是负责合成的,有3’→5’外切核酸酶(校正)活性,所以可以切掉3端的单链,现在的TAQ酶,都是由Klenow片段负责合成,而同时一般还会有一到两种校正活性以保证复制的正确性。由于大部分的酶切后产生的粘性末端都是5’端单链,所以Klenow片段在试验中常利用其5’→3’聚合酶活性合成特性,用于补平酶切后产生的粘性末端,现在的高保真酶如pfu等也可用于来补平粘性末端。而普通TAQ酶无法用于补平是因为普通TAQ酶会在末端加A尾。
关于其相关原理,可以参考生物化学的书,上面写得十分详细。
4楼2011-06-07 17:09:57
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bio-research

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流 2011-06-07 20:34:52
3’→5’外切核酸酶(校正)活性:

this enzyme can cut the first phosphodiester bond from 3`-end if the first nucleotide, just synthesized, can`t compliment with other strand.
家有小子初长成!(Nothing is impossible to a willing heart!)
5楼2011-06-07 19:07:51
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