应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于xba I单酶切后的TA连接
81/1返回列表
查看: 2050  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Zedone

木虫 (正式写手)

[交流] 关于xba I单酶切后的TA连接

由于Xba I酶切后会产生T端，本人最近用Xba I对质粒载体进行单酶切，然后再将目的片段通过与其进行TA连接。在整个过程中，从酶切，胶回收，每一步都做了验证。最后用takara T4 ligase进行16°C过夜连接反应。最终转化后却没有得到转化子。现已验证感受态没有问题。请问有出现过问题的虫友么？此外，在连接时，我另外尝试4°C连接，均未果。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-06 20:00:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Petter_JDW

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
连的上才是奇迹了！你确定你弄懂 粘性末端的结构了么！只有识别序列是5位，第三位为T且切点在T后处的内切酶才可能切出带单个T的口来~如图
5-NNT   NN-3
3-NN   TNN-5
~我查了下，没有发现~~~~~~~
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-06 20:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Petter_JDW

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): Good！ 2012-03-07 12:21:36
补充~下面应该是3-NN  ANN-5~~所以即使有也不能连上的~~~~
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Zedone
3楼2012-03-06 21:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
理论上，XbaI酶切的载体是不能进行TA克隆的，建议你好好研究一下TA克隆的原理及限制性内切酶的原理
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-06 21:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): Good！ 2012-03-07 14:27:22
楼主，要先看懂基因工程原理的教材。只有两端都突出一个T才能与PCR产物连接的。你先搞清楚什么是T载体，很明显XbaI产生的末端T CTAGA不可能连得上PCR产物的。用XcmI可以做T载体。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-07 11:50:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
差点被楼主忽悠了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-07 16:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哈哈，这个问题。。。楼主明显带点小聪明啊
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-07 20:25:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Zedone

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-06 21:05:56:
补充~下面应该是3-NN  ANN-5~~所以即使有也不能连上的~~~~

原来是这样啊。我当时是真的没仔细看xbaI。谢谢你。
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-08 18:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Zedone 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭