24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1906  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Zedone

木虫 (正式写手)


[交流] 关于xba I单酶切后的TA连接

由于Xba I酶切后会产生T端,本人最近用Xba I对质粒载体进行单酶切,然后再将目的片段通过与其进行TA连接。在整个过程中,从酶切,胶回收,每一步都做了验证。最后用takara T4 ligase进行16°C过夜连接反应。最终转化后却没有得到转化子。现已验证感受态没有问题。请问有出现过问题的虫友么?此外,在连接时,我另外尝试4°C连接,均未果。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Zedone

木虫 (正式写手)


送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-06 21:05:56:
补充~下面应该是3-NN  ANN-5~~所以即使有也不能连上的~~~~

原来是这样啊。我当时是真的没仔细看xbaI。谢谢你。
8楼2012-03-08 18:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

Petter_JDW

木虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
连的上才是奇迹了!你确定你弄懂 粘性末端的结构了么!只有识别序列是5位,第三位为T且切点在T后处的内切酶才可能切出带单个T的口来~如图
5-NNT   NN-3
3-NN   TNN-5
~我查了下,没有发现~~~~~~~
2楼2012-03-06 20:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Petter_JDW

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): Good! 2012-03-07 12:21:36
补充~下面应该是3-NN  ANN-5~~所以即使有也不能连上的~~~~

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-03-06 21:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
理论上,XbaI酶切的载体是不能进行TA克隆的,建议你好好研究一下TA克隆的原理及限制性内切酶的原理
4楼2012-03-06 21:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 22专硕求调剂 +9 haoyun上岸 2026-04-11 11/550 2026-04-15 14:47 by elainzaizai
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 复试调剂 +21 积极向上; 2026-04-10 23/1150 2026-04-15 12:50 by 西北望—风沙
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀!! 2026-04-12 21/1050 2026-04-14 16:23 by Art1977
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 求调剂 +12 璃茉一定上岸 2026-04-10 13/650 2026-04-14 00:08 by Equinoxhua
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 一志愿京区985,085401电子信息,本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
信息提示
请填处理意见