应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么pUC18和DNA片段经过Eco1和Hind3酶切后无法连接
41/1返回列表
查看: 1032  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

凌雪

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么pUC18和DNA片段经过Eco1和Hind3酶切后无法连接 已有2人参与

为什么pUC18和DNA片段进过Eco1和Hind3酶切后无法连接，大家帮我分析一下。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-09 14:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyinghu

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):这要看是哪个公司的酶 2010-10-09 18:09:48
EcoRI是有星号活性的，高甘油浓度，Mn2+,低离子强度下，识别序列会改变，估计是你的体系太小了，也就是相应的酶的量加多了，建议放大体系切，buffer多加点
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-10-09 15:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyinghu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
前提是你其他的东西都是没问题的，片度，酶等等
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-10-09 15:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
silicare(金币+1):这个可以试 2010-10-09 18:10:07
出问题的时候，一般要重复一次。再重复的时候一定要加对照，你这儿应该设三个对照：
a, EcoRI 单酶切，然后连接转化；
b, HindIII 单酶切，然后连接转化；
c, 尽可能做一个阳性对照；

而且每个单酶切完了都要跑电泳看一看，是不是单酶切都切开了。因为双酶切跟单酶切的条带电泳的时候基本上分辨不出来。所以，要是你的质粒其中一个酶切位点发生突变，你是肯定连不上的。

祝好运。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-10-09 16:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凌雪 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +5 小熊joy 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:07 by peike
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂（有希望2吗？） +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭