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凌雪

金虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】为什么pUC18和DNA片段经过Eco1和Hind3酶切后无法连接已有2人参与

为什么pUC18和DNA片段进过Eco1和Hind3酶切后无法连接，大家帮我分析一下。谢谢

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1楼 2010-10-09 14:22:47

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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专业: 神经生物学

★
silicare(金币+1):这个可以试 2010-10-09 18:10:07

出问题的时候，一般要重复一次。再重复的时候一定要加对照，你这儿应该设三个对照：
a, EcoRI 单酶切，然后连接转化；
b, HindIII 单酶切，然后连接转化；
c, 尽可能做一个阳性对照；

而且每个单酶切完了都要跑电泳看一看，是不是单酶切都切开了。因为双酶切跟单酶切的条带电泳的时候基本上分辨不出来。所以，要是你的质粒其中一个酶切位点发生突变，你是肯定连不上的。

祝好运。