24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1870  |  回复: 7

liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[交流] Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事?已有4人参与

大家好,我现在在做微卫星标记的开发,第一步就是DNA片段的酶切,内切酶为Sau 3AI ,1ul,10×H Buffer 2 ul , DNA片段量(做了梯度),加水补足20ul。37°消化4h,然后65°10min,(后来又试了80°20min)终止反应,内切酶后来也换新的,电解液也换新的,DNA模板检测了也没有问题,连续做了5次,电泳还是没有带。现在实在是分析不出来原因,请大家多多指点啊,谢谢!我也没有金币啦,第一次在上面求助,希望大家多多帮助啊!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
是没有切开还是切的没有条带了?上图吧,问题都没有描述清楚。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2012-02-17 23:01:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulianwei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-17 23:01:34:
是没有切开还是切的没有条带了?上图吧,问题都没有描述清楚。

跑电泳什么也没有啊,就是没有带啊
3楼2012-02-18 01:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redlizi

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
多少体系?加多少基因组来酶切,又是用的多少来电泳检测?电泳时可用等量未酶切的来对照,很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了
4楼2012-02-18 09:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulianwei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by redlizi at 2012-02-18 09:32:53:
多少体系?加多少基因组来酶切,又是用的多少来电泳检测?电泳时可用等量未酶切的来对照,很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了

20ul体系,DNA(0.5ul/1ul2个梯度,DNA亮度还行,以前跑pcr的时候0.5ul就能跑出片段),最后全部用来电泳,准备切胶啊。“等量的未酶切来对照,”指的是DNA模板吗。“很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不出来了。”意思是DNA模板少了?
5楼2012-02-18 10:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by liulianwei at 2012-02-18 10:07:59:
20ul体系,DNA(0.5ul/1ul2个梯度,DNA亮度还行,以前跑pcr的时候0.5ul就能跑出片段),最后全部用来电泳,准备切胶啊。“等量的未酶切来对照,”指的是DNA模板吗。“很可能是酶切的比较完全,量又太少,所以看不 ...

酶加过了,切的时间太长了。你要知道Sau3AI 是四碱基识别酶。理论上,基因组上平均256bp就有一个酶切位点,如果切的时间太长,酶加太多的话,切成弥散的火箭状了。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2012-02-18 10:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

森林有木

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你家的模板太少啦,电泳点样估计你也点的很少所以看不出来
笑笑别人 笑笑自己
7楼2012-03-05 15:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

他她0328

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1.酶量太大,这个酶是10U/ul,你的体系是20ul,加10U的酶,量确实过大。
2.酶切时间太久,我回收的片段大些,酶切时间几分钟就好了,而且酶浓度是0.01U/ug,所以建议你适当缩短酶切时间,降低酶浓度。
8楼2012-03-06 13:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liulianwei 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见