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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » HindIII酶切基因组DNA
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oceanworld

木虫 (小有名气)

[求助] HindIII酶切基因组DNA

各位大哥大姐，我利用HindIII酶切基因组ＤＮＡ，３７度酶切４，８,１２个小时后，琼脂糖检测后总是觉得没有酶切完全，酶切片段都集中在ｍａｒｋｅｒ之上，用的是１００ｂｐ的ｍａｒｋｅｒ，最上面的条带为１５００ｂｐ。酶切体系：ＤＮＡ：１．５ｕｌ（约１ｕｇ），ｂｕｆｆｅｒ：２ｕｌ，酶：１ｕｌ，ｗａｔｅｒ：１６ｕｌ。图片依为１２ｈ的。其余4h和8h的均差不多。ＨｉｎｄＩＩＩ酶为ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司。请各位帮我看下究竟是什么原因呢？谢谢
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amilie030312

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1楼 2011-07-14 08:08:04
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

oceanworld(金币+1): 2011-07-14 12:29:13
已经切开了，可以用了，酶没有问题，你用的MARKER太小了。
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2楼2011-07-14 08:47:52
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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3楼2011-07-18 11:33:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-07-18 12:19:21
基因组DNA的话，你这样看不太好，可能是跑胶跑得不够的原因，MARKER太小，不适合。
如果0.8%的胶  30MIN 100伏 跑出来的是比较均匀的抹带。不知道你的胶的浓度和电压时间。但是这么看虽然看着像切开了  但是不太抹。
没有蛋白污染的话 一般是切得开的。
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4楼2011-07-18 11:47:54
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amilie030312

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
确定片段大小，如果切开后是在1500以上那就换个大点的Marker再跑一下看看，如果切开后的片段在1500以下那就换家公司的HindIIII试试看。
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5楼2011-07-18 12:19:01
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