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oceanworld

木虫 (小有名气)

[求助] HindIII酶切基因组DNA

各位大哥大姐,我利用HindIII酶切基因组DNA,37度酶切4,8,12个小时后,琼脂糖检测后总是觉得没有酶切完全,酶切片段都集中在marker之上,用的是100bp的marker,最上面的条带为1500bp。酶切体系:DNA:1.5ul(约1ug),buffer:2ul,酶:1ul,water:16ul。图片依为12h的。其余4h和8h的均差不多。HindIII酶为fermentas公司。请各位帮我看下究竟是什么原因呢?谢谢
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

oceanworld(金币+1): 2011-07-14 12:29:13
已经切开了,可以用了,酶没有问题,你用的MARKER太小了。
2楼2011-07-14 08:47:52
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匿名

用户注销 (初入文坛)

本帖仅楼主可见
3楼2011-07-18 11:33:12
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)


silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-07-18 12:19:21
基因组DNA的话,你这样看不太好,可能是跑胶跑得不够的原因,MARKER太小,不适合。
如果0.8%的胶  30MIN 100伏 跑出来的是比较均匀的抹带。不知道你的胶的浓度和电压时间。但是这么看虽然看着像切开了  但是不太抹。
没有蛋白污染的话 一般是切得开的。
4楼2011-07-18 11:47:54
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amilie030312

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
确定片段大小,如果切开后是在1500以上那就换个大点的Marker再跑一下看看,如果切开后的片段在1500以下那就换家公司的HindIIII试试看。
5楼2011-07-18 12:19:01
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