应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌基因组的单酶切问题
51/1返回列表
查看: 1407  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

梦想起飞

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌基因组的单酶切问题 已有2人参与

各位虫友，我最近做了好几次梭菌全基因组的单酶切，跑的电泳条带觉得不对劲，大家帮我看看吧，多谢虫友们啦！下边我说说具体情况。首先按照CTAB法提取了细菌的基因组DNA，1%琼脂糖电泳检测，然后0.8%琼脂糖切胶回收，试剂盒纯化，1%琼脂糖检测纯化产物。然后按照如下体系进行酶切：第一次：BamH 1   1ul，10*buffer 3  5ul，DNA 20ul ，ddH2O  24ul，总体系50ul。第二次：BamH 1   0.5ul，10*buffer3  3ul，DNA 10ul ，ddH2O  16.5ul，总体系30ul。第三次：Pme 1   1ul，10*buffer4  3ul，DNA 8ul ，100*BSA  0.3ul，ddH2O  17.7ul，总体系30ul。都是37度酶切5小时或者以上。然后1%琼脂糖电泳检测，图片在附件中。marker用的是2-log。图片中的带状都是DNA的位置开始向下一抹弥散。这是怎么造成的呢？老师说图片应该是两种情况，要么是整个泳道弥散状，要么是几条带。我怎么跑出来是一点弥散呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-16 21:37:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-17 22:52:53
Bam HI 是比较好用的酶，道理上是比较好切的，5h应该可以彻底酶切。

可以考虑：换一种酶看看，比如 Hind III，如果这个酶能切开的话，那可能是BamHI 酶有问题或者这个基因组中的BamHI切点比较稀少。

尽量用大一点的体系，能用50不用30； 做个DNA量的梯度，20ul， 10ul， 5ul。

不妨试试过夜酶切。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-16 21:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-16 21:43:23:
Bam HI 是比较好用的酶，道理上是比较好切的，5h应该可以彻底酶切。

可以考虑：换一种酶看看，比如 Hind III，如果这个酶能切开的话，那可能是BamHI 酶有问题或者这个基因组中的BamHI切点比较稀少。

尽量用 ...

谢谢交流！
我又用Pme 1试过了，条带基本还是一个模样。另外，我原先用的是NEB的酶，也试过了Takara的BamH 1，也是那样！晕啊！不知道怎么回事。今天让老师看了看，说让我同时用两个酶切一下看看。我想找找别人有没有单酶切过基因组，看看别人跑的电泳图是什么样子的，可是没找到。有几个文献中这么做过，遗憾的是文中没图片。唉……
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-17 22:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励一下~~ 2011-01-28 15:30:04
southern 做的时候大都是单酶切，我看过当时宿舍的一个搞植物的酶切图谱，是很整齐的条带。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2011-01-17 22:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想起飞

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-17 22:17:06:
southern 做的时候大都是单酶切，我看过当时宿舍的一个搞植物的酶切图谱，是很整齐的条带。

哦，好的，多谢啦！最近回家气氛浓厚，我先提点DNA保存好，下学期来了再做把，呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-18 16:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梦想起飞 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:38 by 无际的草原
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 0857 资源与环境 285分 +6 未名考生 2026-03-09 6/300 2026-03-11 21:08 by 30660438
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭