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hanxganvet

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】如何构建细菌的基因组表达文库

各位大侠,本人现在正在做细菌的基因组表达文库,遇到一些问题,想向论坛里的高手请教

     细菌基因组文库构建时细菌基因组和载体连接比例如何?
     构建一个500-3000bp的文库,克隆数在4万个左右,大约需要多少载体和基因组?

     连接时那个公司的连接酶比较好?
    去磷酸化时用碱性磷酸酶时,使用那个剂量比较好?
    构建文库必须用电转化吗?化学转化行不行?
    在线急等,越详细越好,谢谢了
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hanxganvet

木虫 (正式写手)


引用回帖:
1627144楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-20 18:54:38
您好,请问通过蓝白斑筛选是不是可以排除掉大部分的自连克隆?...

前提是你的载体可以进行蓝白斑筛选.
16楼2012-12-21 08:55:41
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普通回帖
★ ★ ★ ★
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3):good 2011-01-11 09:45:36
hanxganvet(金币+1): 2011-04-01 08:30:57
比例的问题要自己摸索。

载体和基因组的需求量视你的转化率及转化次数而定。一次提够就行了。

NEB、Promega的T4较好用

去磷酸化能用SAP则不用CIAP,用量根据推荐的来就OK。

为达克隆总数,转化次数越少则均一性越好。
2楼2011-01-10 20:50:00
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zmw_520

禁虫 (小有名气)


hanxganvet(金币+1):谢谢参与
hanxganvet(金币+1): 2011-04-01 08:31:06
本帖内容被屏蔽

3楼2011-01-10 21:23:35
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★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-11 09:45:53
hanxganvet(金币+1): 2011-04-01 08:31:09
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-01-10 21:23:35:

SAP比CIAP好在哪???谢谢~~~我不去磷酸化可以吗???

SAP比CIAP失活更彻底,不会妨碍后面的连接反应。单酶切不去磷酸化,你等着挑自连的克隆么?
4楼2011-01-10 21:27:34
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快乐的小草

新虫 (初入文坛)



hanxganvet(金币+1):谢谢参与
我也要做基因文库,请问一般该用什么质粒和什么表达宿主啊!
11楼2011-12-26 16:11:33
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)



hanxganvet(金币+1): 谢谢参与
ding
12楼2012-09-12 19:51:43
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)


我也现在在构建文库,但是我酶切的片段的大小在20kb之间,所以就一直卡在这里没办法进行,不知道用什么载体,和转化
13楼2012-09-12 19:53:04
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bioestablish

新虫 (初入文坛)


hanxganvet(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

14楼2012-10-29 10:21:33
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hraikeyan

金虫 (小有名气)



hanxganvet(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
155870楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-10 20:50:00
比例的问题要自己摸索。

载体和基因组的需求量视你的转化率及转化次数而定。一次提够就行了。

NEB、Promega的T4较好用

去磷酸化能用SAP则不用CIAP,用量根据推荐的来就OK。

为达克隆总数,转化次数越少 ...

您好,请问通过蓝白斑筛选是不是可以排除掉大部分的自连克隆?
15楼2012-12-20 18:54:38
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hraikeyan

金虫 (小有名气)


引用回帖:
1627170楼: Originally posted by hanxganvet at 2012-12-21 08:55:41
前提是你的载体可以进行蓝白斑筛选....

可以的,我昨天做了一次转化,发现里面的蓝斑很少,就几个。所以我怀疑有些空载体没有显现出来。
17楼2012-12-21 09:09:14
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lingsheshidu

金虫 (小有名气)



hanxganvet(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
13楼: Originally posted by luhaoHuang at 2012-09-12 19:53:04
我也现在在构建文库,但是我酶切的片段的大小在20kb之间,所以就一直卡在这里没办法进行,不知道用什么载体,和转化

你好,你做基因组表达文库了吗,你用的什么表达载体和菌株啊?
18楼2015-03-11 05:52:24
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lingsheshidu

金虫 (小有名气)


送红花一朵
你好,你做基因组表达文库,用的什么载体和菌株啊?基因组表达文库,怎么解决插入方向的问题?望赐教。
19楼2015-03-11 05:53:12
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)



hanxganvet(金币+1): 谢谢参与
请问选择什么载体和宿主好啊
20楼2018-06-28 15:45:59
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简单回复
tammie5楼
2011-01-10 21:42   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
hanxganvet(金币+1): 2011-04-01 08:31:17
UFOWUHAN6楼
2011-01-10 21:44   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
qingweibu7楼
2011-01-10 21:51   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
silicare8楼
2011-01-11 08:37   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
zhjzh0029楼
2011-01-11 08:59   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
hanxganvet(金币+1): 2011-04-01 08:31:25
liuxing1-110楼
2011-12-24 15:09   回复  
hanxganvet(金币+1):谢谢参与
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