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新虫 (初入文坛)

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[交流] 【产品测评分享】体外转录产量不理想、dsRNA 副产物高？T7 RNA 聚合酶实测体验

各位虫友，做体外转录、mRNA 合成的小伙伴，应该经常碰到这类难题：模板、NTP 都反复优化，RNA 产量始终上不去；转细胞实验时非特异性免疫背景很重，溯源发现是转录产生大量 dsRNA 副产物；部分酶批次差异大，小试效果尚可，放大制备就容易翻车；还有 RNase 污染造成 RNA 降解，辛苦制备的样品直接报废。

为解决课题组以及合作客户在体外转录中的痛点，我们公司开发了这款重组 T7 RNA 聚合酶（货号 DGN01），内部实验室以及合作课题组已经做过大量测试，在这里把实测情况分享出来，给有需求的虫友多一个试剂选型参考。

这款 T7 RNA 聚合酶来源于噬菌体 T7，对 T7 启动子具备高度专一识别能力，不会非特异性结合模板其他序列，转录过程可控。核心优势体现在两方面，一方面转录活性高，体系可支持毫克级 RNA 放大制备；另一方面能够有效控制 dsRNA 免疫副产物，减轻后续 RNA 纯化压力，对后续细胞功能实验十分友好。

酶蛋白纯度≥95%，严格控制核酸酶残留，保障转录后 RNA 的完整度。产品套装配套完整 10×T7 转录缓冲液以及 DTT 缓冲液，无需自行配制复杂组分，直接搭建 20 μL 标准反应体系，37℃孵育 1‑2 小时即可完成转录，新手也可以快速上手。

结合大量客户反馈，分享两个高频踩坑注意点：

1. 模板 DNA 建议在转录区域下游酶切为平端或者 5′突出末端，能够显著提升转录效率；3’突出末端会降低转录产出；
2. 缓冲液含有亚精胺，容易和核酸结合形成不溶物，反应体系现配现用，混匀后立即放入孵育，不要长时间冰上静置。

产品基础信息：
货号：DGN01
浓度：50 U/μL
保存：‑20℃，有效期 12 个月
包装规格：5000 Units、25000 Units，兼顾实验室小试摸索以及平台大批量 RNA 制备。

主要适用场景

1. mRNA 体外转录制备：科研级 mRNA 合成，低 dsRNA 副产物，降低细胞免疫干扰；
2. RNA 探针、反义 RNA 合成，用于原位杂交、RNase 保护实验；
3. RNAi 相关研究，减少副产物带来的实验干扰；
4. RNA 结构、体外生化功能的基础机制研究。

注意：本产品仅限科研使用，不可用于临床体内实验；避免反复冻融，建议‑20℃储存。

目前已有不少合作课题组把这款酶用于 mRNA 制备项目，对比多款进口、国产同类 T7 酶，在放大转录能力、控制双链副产物、批次稳定性上表现突出，帮助大家节省纯化成本与重复实验的时间。

大家如果在体外转录实验上遇到问题，可以在帖子下面留言交流技术问题；有需要了解产品细节、试用、报价的虫友，欢迎私信沟通。

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