| 查看: 3027 | 回复: 12 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
zct2008至尊木虫 (著名写手)
|
[求助]
求助：基因组文库构建时一般用什么Marker？
|
||
| 本人正在构建一个细菌基因组文库，按照《分子克隆实验指南》，提取全基因组以后用Sau3AI进行部分酶切，然后电泳分离30-45kb大小的片段。想请教一下大家：电泳分离30-45kb大小的片段时一般用什么Marker？一般常用的Marker没有这么大的，不知道大家都是用什么作为分子量标准的？请做过基因组文库构建的朋友帮忙，非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有231人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因组文库构建时DNA酶切片段用胶回收吗？
已经有7人回复
- 基因组文库-----genomic library
已经有11人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- 求助：大肠杆菌基因组的提取
已经有6人回复
- 【求助/交流】请问大家已基因组为模板进行扩增，一般用什么酶效果要好一些？
已经有4人回复
- 【求助/交流】非变性蛋白电泳用什么marker
已经有5人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】如何构建细菌的基因组表达文库
已经有19人回复
- 【求助/交流】我刚提的植物基因组DNA的电泳图，请高手看看
已经有12人回复
- 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？
已经有18人回复
- 【求助/交流】基因组电泳结果
已经有22人回复
- 【求助/交流】提取的植物基因组DNA电泳图，疑问？？？
已经有17人回复
- 【求助/交流】有构建植物BAC文库的同学？一起交流吧
已经有17人回复
srlee
铁杆木虫 (小有名气)
- MolEPI: 7
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 4480.7
- 散金: 29
- 红花: 3
- 帖子: 222
- 在线: 511.1小时
- 虫号: 802845
- 注册: 2009-07-03
- 专业: 生物防治
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
zct2008(金币+1): 谢谢帮助！ 2011-07-08 15:37:06
西瓜(金币+6, EPI+1): 一起奖励了！ 2011-07-08 19:15:28
zct2008(金币+1): 谢谢帮助！ 2011-07-08 15:37:06
西瓜(金币+6, EPI+1): 一起奖励了！ 2011-07-08 19:15:28
|
1）如果是建BAC文库的话，分离DNA用脉冲场跑效果很好，根据你自己实验的需要选择合适的marker。 2）如果是建fosmid文库的话，用低电压过夜电泳足够了，在没有control marker的条件下，选用λHindIII 也可以用。 3）在脉冲场电泳中，由于λHindIII marker太小我没有用过，所以对其在跑电泳过程中的迁移距离也没有概念，不好意思！ 4）分离大片段DNA是不是一定要用脉冲场电泳？我只能说根据自己的实验需求来合理安排实验！ |
10楼2011-07-08 15:12:26
zct2008
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 15490.1
- 红花: 6
- 帖子: 1320
- 在线: 350.7小时
- 虫号: 166016
- 注册: 2006-01-13
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2011-06-01 20:35:28
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19772.7
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6619
- 在线: 2792.5小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
3楼2011-06-02 01:13:09
4楼2011-07-03 19:18:46
weekend883
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1117
- 散金: 100
- 帖子: 130
- 在线: 78.1小时
- 虫号: 493325
- 注册: 2008-01-10
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2011-07-07 07:36:21
srlee
铁杆木虫 (小有名气)
- MolEPI: 7
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 4480.7
- 散金: 29
- 红花: 3
- 帖子: 222
- 在线: 511.1小时
- 虫号: 802845
- 注册: 2009-07-03
- 专业: 生物防治
【答案】应助回帖
★ ★ ★
zct2008(金币+2): 谢谢！有构建文库的试剂盒吗？能否推荐几个比较好的公司？另外，λHindIII marker最大只有23130bp，还是不太合适。 2011-07-07 15:52:53
西瓜(金币+3): Good！可否回答楼主下面的追问？ 2011-07-07 22:36:08
zct2008(金币+2): 谢谢！有构建文库的试剂盒吗？能否推荐几个比较好的公司？另外，λHindIII marker最大只有23130bp，还是不太合适。 2011-07-07 15:52:53
西瓜(金币+3): Good！可否回答楼主下面的追问？ 2011-07-07 22:36:08
|
1）用试剂盒构建文库可能比较快速和高效，好多公司也都有卖。 2）至于marker，在cosmid或fosmid试剂盒中会提供一个42kb的control DNA。 3）其实，要是建cosmid这样30-40kb的文库的话，用λHindIII marker也可以用的。 |
6楼2011-07-07 12:18:45
7楼2011-07-07 21:33:30
srlee
铁杆木虫 (小有名气)
- MolEPI: 7
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 4480.7
- 散金: 29
- 红花: 3
- 帖子: 222
- 在线: 511.1小时
- 虫号: 802845
- 注册: 2009-07-03
- 专业: 生物防治
8楼2011-07-08 10:46:14
9楼2011-07-08 14:34:02
50