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zct2008至尊木虫 (著名写手)
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[求助]
求助：基因组文库构建时一般用什么Marker？
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| 本人正在构建一个细菌基因组文库，按照《分子克隆实验指南》，提取全基因组以后用Sau3AI进行部分酶切，然后电泳分离30-45kb大小的片段。想请教一下大家：电泳分离30-45kb大小的片段时一般用什么Marker？一般常用的Marker没有这么大的，不知道大家都是用什么作为分子量标准的？请做过基因组文库构建的朋友帮忙，非常感谢！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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srlee
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
zct2008(金币+1): 谢谢帮助！ 2011-07-08 15:37:06
西瓜(金币+6, EPI+1): 一起奖励了！ 2011-07-08 19:15:28
zct2008(金币+1): 谢谢帮助！ 2011-07-08 15:37:06
西瓜(金币+6, EPI+1): 一起奖励了！ 2011-07-08 19:15:28
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1）如果是建BAC文库的话，分离DNA用脉冲场跑效果很好，根据你自己实验的需要选择合适的marker。 2）如果是建fosmid文库的话，用低电压过夜电泳足够了，在没有control marker的条件下，选用λHindIII 也可以用。 3）在脉冲场电泳中，由于λHindIII marker太小我没有用过，所以对其在跑电泳过程中的迁移距离也没有概念，不好意思！ 4）分离大片段DNA是不是一定要用脉冲场电泳？我只能说根据自己的实验需求来合理安排实验！ |
10楼2011-07-08 15:12:26
zct2008
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2楼2011-06-01 20:35:28
冼亮淀粉酶
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weekend883
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5楼2011-07-07 07:36:21
srlee
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
zct2008(金币+2): 谢谢！有构建文库的试剂盒吗？能否推荐几个比较好的公司？另外，λHindIII marker最大只有23130bp，还是不太合适。 2011-07-07 15:52:53
西瓜(金币+3): Good！可否回答楼主下面的追问？ 2011-07-07 22:36:08
zct2008(金币+2): 谢谢！有构建文库的试剂盒吗？能否推荐几个比较好的公司？另外，λHindIII marker最大只有23130bp，还是不太合适。 2011-07-07 15:52:53
西瓜(金币+3): Good！可否回答楼主下面的追问？ 2011-07-07 22:36:08
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1）用试剂盒构建文库可能比较快速和高效，好多公司也都有卖。 2）至于marker，在cosmid或fosmid试剂盒中会提供一个42kb的control DNA。 3）其实，要是建cosmid这样30-40kb的文库的话，用λHindIII marker也可以用的。 |
6楼2011-07-07 12:18:45
7楼2011-07-07 21:33:30
srlee
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