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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot时marker问题求助
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开，应该有九条带，其中红色的是72KD，72KD上面有三条，下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显，但是，72KD以下只有2条，以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的，而且我们实验室不是第一次出现这个情况有，希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗？
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1楼 2011-07-08 15:05:59
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？
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2楼2011-07-08 15:48:34
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？

不是，我不是转膜出了问题，是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker，今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么？转膜是没问题的。

电泳的条件是70V，恒压，120min，从浓缩胶到分离胶不变电压，一直往下跑。一般来说都是正常的，但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况，不知道为什么？
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3楼2011-07-08 16:34:22
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
我有时候marker也看不到，一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
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4楼2011-07-08 18:12:57
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juliana_zou11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-08 20:11:37
增加上样量试试
之前我们做一般上2ul Marker,转膜之后很淡，甚至15kd的都几乎看不出来
有个人上了10ul大家一看，哇太清晰了
如果还是不行就是你的胶配的不是很好。胶如果不均一跑电泳会比较难看，而且marker可能跑不开，挤在一起
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5楼2011-07-08 18:38:41
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xiewenjie

新虫 (初入文坛)
学习一下
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6楼2011-07-09 08:50:54
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得有以下可能：
1.胶浓度问题2.marker质量问题。
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7楼2011-07-09 09:32:09
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txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得也是你的marker存在问题，我们买过七八种marker，也没有遇到多这种情况，你可以联系商家，然后给你们换换。
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Wholaughslast,wholaughsbest!!
8楼2011-07-09 20:10:56
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txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

虽然没有遇到楼主的这种问题，但是我在做WB时遇到了各种各样的其他问题，比如重复性太差，一次一次实验不一样，同一东西同样条件转膜，第一次出来条带，后一次却怎么也出不来？大家有遇到过吗？
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Wholaughslast,wholaughsbest!!
9楼2011-07-09 20:18:44
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txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

虽然没有遇到楼主的这种问题，但是我在做WB时遇到了各种各样的其他问题，比如重复性太差，一次一次实验不一样，同一东西同样条件转膜，第一次出来条带，后一次却怎么也出不来？大家有遇到过吗？
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Wholaughslast,wholaughsbest!!
10楼2011-07-09 20:19:04
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