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昭夕1988

新虫 (初入文坛)

[求助] western之抗体选择问题

我用Native-PAGE跑的胰岛素，转膜后用丽春红可以染出条带，但用博奥森的胰岛素抗体和goat anti-rabbit lgG/HRP（TBST稀释的）4度过夜孵育后，加ECL用凝胶成像仪曝光却不显影，是怎么回事？ECL配制出来是淡棕色还是无色？具体操作是什么，怎样才能让ECL均匀覆盖在膜上？谢谢
western之抗体选择问题
2013-10-02_11-45-26_8bit.png
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1楼 2013-11-03 20:48:03
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-04 00:55:39
昭夕1988: 金币+2 2013-11-06 11:08:14
抗体用TBST+3-5%的奶粉稀释。 ECL 显影液有一点就可以了， 可以拿枪头吹打到膜上
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nostalgia
2楼2013-11-04 00:24:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的一抗是抗兔的吗？
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3楼2013-11-04 01:25:59
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昭夕1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-04 01:25:59
你的一抗是抗兔的吗？

rabbit anti-insulin
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4楼2013-11-04 09:57:38
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luckybobozai

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-06 00:52:30
ECL 配好后均匀撒在膜上就行   你曝光多久？
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永远的永远~~
5楼2013-11-04 11:33:15
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昭夕1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by luckybobozai at 2013-11-04 11:33:15
ECL 配好后均匀撒在膜上就行   你曝光多久？

ECL用移液枪加上，用保鲜膜包住，直接放到凝胶成像仪里曝光
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6楼2013-11-05 12:07:58
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彤彤winni

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-06 00:52:43
昭夕1988: 金币+2, ★有帮助 2013-11-07 11:55:43
博奥森的抗体做不出来很正常的，我买的β-actin还有问题呢。可以换别家的抗体试试。
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人生若只如初见
7楼2013-11-05 21:35:38
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昭夕1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 彤彤winni at 2013-11-05 21:35:38
博奥森的抗体做不出来很正常的，我买的β-actin还有问题呢。可以换别家的抗体试试。

那么哪家的好点？
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8楼2013-11-06 11:09:02
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彤彤winni

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 昭夕1988 at 2013-11-06 11:09:02
那么哪家的好点？...

碧云天的抗体不错，而且回收的抗体可以多次重复利用，我曾经用过的一支抗体，重复利用了4次结果都很好，很稳定，但是碧云天抗体种类比较少。其他的就是国外抗体了，比如CST、AB抗等。
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人生若只如初见
9楼2013-11-07 18:12:29
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