应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
241/3返回列表123下一页
查看: 2670  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊

western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊Sample Text

黑乎乎的是目标蛋白  清晰的是看家蛋白   目标用TBST洗两个小时了
western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
6.4.JPG


western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊-1
E3-3-I3-3，A1-0-I1-0，C3-2-I3-2  2013.5.21.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-04 18:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:25:35
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:15
你这个黑乎乎的一片一般原因有2：一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行，目的蛋白含量也不高
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2013-06-05 15:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

1759005335

铁虫 (初入文坛)
洗膜的时候是不是几张片子压在一起了
赞一下 回复此楼
just do it
2楼2013-06-04 20:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\\\\\\\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-05 09:13:42
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:15:52
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:26
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-04 21:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:13:52
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:17:20
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-04 23:01:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1, ★有帮助 2013-06-05 17:18:58
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-05 08:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:19:46
感觉可能是一抗的问题。
赞一下 回复此楼
小兵一个
6楼2013-06-05 09:30:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-06-04 21:59:22
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的

我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2，我用的就是Santa的一抗，六个抗体都是这样，我用的都是脱脂奶粉封闭的，之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带，我压膜时间缩短也看不到特异条带，如果用牛血清蛋白封闭的话是多大浓度啊，
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-05 17:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by porphybaby at 2013-06-04 23:01:58
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？

不是啊 我蛋白上样量都至少80微克了，下面的是GAPDH看家很好的，缩短曝光时间也看不到目标
赞一下 回复此楼
9楼2013-06-05 17:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-05 08:24:09
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。

如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题？求解。我的蛋白上样至少在80微克，
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-05 17:18:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stt19890101 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +7 不知道叫什么！ 2026-03-15 8/400 2026-03-15 20:11 by 棒棒球手
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 材料调剂，307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭