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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot 封完抗体,目标蛋白看不到,但是看家很好是怎么回事啊

western blot  封完抗体,目标蛋白看不到,但是看家很好是怎么回事啊Sample Text

黑乎乎的是目标蛋白  清晰的是看家蛋白   目标用TBST洗两个小时了
western blot  封完抗体,目标蛋白看不到,但是看家很好是怎么回事啊
6.4.JPG


western blot  封完抗体,目标蛋白看不到,但是看家很好是怎么回事啊-1
E3-3-I3-3,A1-0-I1-0,C3-2-I3-2  2013.5.21.JPG
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songzuowei

木虫 (著名写手)

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★ ★
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stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:25:35
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:15
你这个黑乎乎的一片一般原因有2:一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行,目的蛋白含量也不高
7楼2013-06-05 15:28:55
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普通回帖

1759005335

铁虫 (初入文坛)

洗膜的时候是不是几张片子压在一起了
just do it
2楼2013-06-04 20:56:30
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leechau2007

木虫 (初入文坛)

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stt19890101(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\\\\\\\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-05 09:13:42
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:15:52
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:26
你做的是什么蛋白,有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好,有些要牛血清白蛋白效果好,还有就是有可能你抗体浓度用高了,再有你要是用的Santa的一抗,也有可能出现这个情况,买Santa的抗体要看运气的
3楼2013-06-04 21:59:22
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porphybaby

金虫 (正式写手)

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★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-06-05 09:13:52
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:17:20
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了??
4楼2013-06-04 23:01:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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stt19890101: 金币+1, 有帮助 2013-06-05 17:18:58
可能是目的蛋白的一抗不好,或者目的蛋白在样品中含量很低,超出western检出限。
5楼2013-06-05 08:24:09
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:19:46
感觉可能是一抗的问题。
小兵一个
6楼2013-06-05 09:30:49
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-06-04 21:59:22
你做的是什么蛋白,有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好,有些要牛血清白蛋白效果好,还有就是有可能你抗体浓度用高了,再有你要是用的Santa的一抗,也有可能出现这个情况,买Santa的抗体要看运气的

我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2,我用的就是Santa的一抗,六个抗体都是这样,我用的都是脱脂奶粉封闭的,之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带,我压膜时间缩短也看不到特异条带,如果用牛血清蛋白封闭的话是多大浓度啊,
8楼2013-06-05 17:15:36
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by porphybaby at 2013-06-04 23:01:58
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了??

不是啊 我蛋白上样量都至少80微克了,下面的是GAPDH看家很好的,缩短曝光时间也看不到目标
9楼2013-06-05 17:17:11
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-05 08:24:09
可能是目的蛋白的一抗不好,或者目的蛋白在样品中含量很低,超出western检出限。

如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题?求解。我的蛋白上样至少在80微克,
10楼2013-06-05 17:18:48
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