24小时热门版块排行榜    

查看: 2670  |  回复: 23

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-06-05 09:30:49
感觉可能是一抗的问题。

我们买了那么多一抗都是这样的问题  是不是santa的抗体很不靠谱啊
11楼2013-06-05 17:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-05 15:28:55
你这个黑乎乎的一片一般原因有2:一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行,目的蛋白含量也不高

封闭效果不好?请问是封闭时间不够呢还是封闭的东西不行?我用的3%脱脂奶粉TBST缓冲液,压片时间缩短也看不到目标,应该不是压片时间的问题,我用的抗体是santa的,上样在80微克,
12楼2013-06-05 17:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 1759005335 at 2013-06-04 20:56:30
洗膜的时候是不是几张片子压在一起了

没有啊 都是一个一个盒子的
13楼2013-06-05 17:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:22:28
封闭效果不好?请问是封闭时间不够呢还是封闭的东西不行?我用的3%脱脂奶粉TBST缓冲液,压片时间缩短也看不到目标,应该不是压片时间的问题,我用的抗体是santa的,上样在80微克,...

脱脂奶粉的话我一般用5%的,BSA用3%的,不知道你封闭多长时间,一般4°过夜效果很好
14楼2013-06-05 17:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:47:12
引用回帖:
10楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:18:48
如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题?求解。我的蛋白上样至少在80微克,...

一般的看家基因的表达量会比较大,而且抗体也是很好用的。目的蛋白的表达量和抗体都不好说,所以出现这种情况也不奇怪。如果上样量已经很大了,试试调整一抗的稀释倍数。
15楼2013-06-06 02:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:16:02
stt19890101: 金币+2, 有帮助 2013-06-08 13:17:37
引用回帖:
10楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:18:48
如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题?求解。我的蛋白上样至少在80微克,...

你的内参没问题,基本上可以说明不是样品准备的问题了,上样80肯定算多的了。你说的LDLR和SREBP2两个蛋白本身就不是很好做,建议你更换新的一抗试试。另:查看一抗和二抗种属以及你所研究的细胞或组织是否高表达二者。祝好!
满堂花醉三千客,更无一人是知音。
16楼2013-06-06 13:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by xiangyu9356 at 2013-06-06 13:27:13
你的内参没问题,基本上可以说明不是样品准备的问题了,上样80肯定算多的了。你说的LDLR和SREBP2两个蛋白本身就不是很好做,建议你更换新的一抗试试。另:查看一抗和二抗种属以及你所研究的细胞或组织是否高表达二 ...

好的  谢谢
17楼2013-06-08 13:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-05 17:24:22
脱脂奶粉的话我一般用5%的,BSA用3%的,不知道你封闭多长时间,一般4°过夜效果很好...

封闭一抗就是过夜的  一般都在12个小时   我没有用过BSA  bsa是买的现成的吗?效果怎么样
18楼2013-06-08 13:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-08 13:19:24
封闭一抗就是过夜的  一般都在12个小时   我没有用过BSA  bsa是买的现成的吗?效果怎么样...

BSA是胎牛血清啊 成瓶粉末状的 现用现配 比较贵 理论上肯定BSA效果好 不过用脱脂奶粉就可以了
19楼2013-06-08 13:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leechau2007

木虫 (初入文坛)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:47:28
引用回帖:
8楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:15:36
我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2,我用的就是Santa的一抗,六个抗体都是这样,我用的都是脱脂奶粉封闭的,之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带,我压膜时间缩短也看不 ...

牛血清白蛋白和奶粉一样都是质量分数5%的TTBS溶液,封闭的时间加长点,可以封闭两个小时,条带一片黑和转膜时间没有多大关系,正常转就可以,一抗的浓度可以继续稀释,同时加大二抗浓度。如果还是这样,就要考虑和抗体公司扯皮了。
20楼2013-06-13 19:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stt19890101 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂! +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂(085602一志愿985) +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[硕博家园] 木虫好像不热闹了,是不是? +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
请填处理意见