24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2721  |  回复: 23

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-06-05 09:30:49
感觉可能是一抗的问题。

我们买了那么多一抗都是这样的问题  是不是santa的抗体很不靠谱啊
11楼2013-06-05 17:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-05 15:28:55
你这个黑乎乎的一片一般原因有2:一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行,目的蛋白含量也不高

封闭效果不好?请问是封闭时间不够呢还是封闭的东西不行?我用的3%脱脂奶粉TBST缓冲液,压片时间缩短也看不到目标,应该不是压片时间的问题,我用的抗体是santa的,上样在80微克,
12楼2013-06-05 17:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 1759005335 at 2013-06-04 20:56:30
洗膜的时候是不是几张片子压在一起了

没有啊 都是一个一个盒子的
13楼2013-06-05 17:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:22:28
封闭效果不好?请问是封闭时间不够呢还是封闭的东西不行?我用的3%脱脂奶粉TBST缓冲液,压片时间缩短也看不到目标,应该不是压片时间的问题,我用的抗体是santa的,上样在80微克,...

脱脂奶粉的话我一般用5%的,BSA用3%的,不知道你封闭多长时间,一般4°过夜效果很好
14楼2013-06-05 17:24:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:47:12
引用回帖:
10楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:18:48
如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题?求解。我的蛋白上样至少在80微克,...

一般的看家基因的表达量会比较大,而且抗体也是很好用的。目的蛋白的表达量和抗体都不好说,所以出现这种情况也不奇怪。如果上样量已经很大了,试试调整一抗的稀释倍数。
15楼2013-06-06 02:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:16:02
stt19890101: 金币+2, 有帮助 2013-06-08 13:17:37
引用回帖:
10楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:18:48
如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题?求解。我的蛋白上样至少在80微克,...

你的内参没问题,基本上可以说明不是样品准备的问题了,上样80肯定算多的了。你说的LDLR和SREBP2两个蛋白本身就不是很好做,建议你更换新的一抗试试。另:查看一抗和二抗种属以及你所研究的细胞或组织是否高表达二者。祝好!
满堂花醉三千客,更无一人是知音。
16楼2013-06-06 13:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by xiangyu9356 at 2013-06-06 13:27:13
你的内参没问题,基本上可以说明不是样品准备的问题了,上样80肯定算多的了。你说的LDLR和SREBP2两个蛋白本身就不是很好做,建议你更换新的一抗试试。另:查看一抗和二抗种属以及你所研究的细胞或组织是否高表达二 ...

好的  谢谢
17楼2013-06-08 13:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-05 17:24:22
脱脂奶粉的话我一般用5%的,BSA用3%的,不知道你封闭多长时间,一般4°过夜效果很好...

封闭一抗就是过夜的  一般都在12个小时   我没有用过BSA  bsa是买的现成的吗?效果怎么样
18楼2013-06-08 13:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-08 13:19:24
封闭一抗就是过夜的  一般都在12个小时   我没有用过BSA  bsa是买的现成的吗?效果怎么样...

BSA是胎牛血清啊 成瓶粉末状的 现用现配 比较贵 理论上肯定BSA效果好 不过用脱脂奶粉就可以了
19楼2013-06-08 13:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leechau2007

木虫 (初入文坛)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:47:28
引用回帖:
8楼: Originally posted by stt19890101 at 2013-06-05 17:15:36
我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2,我用的就是Santa的一抗,六个抗体都是这样,我用的都是脱脂奶粉封闭的,之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带,我压膜时间缩短也看不 ...

牛血清白蛋白和奶粉一样都是质量分数5%的TTBS溶液,封闭的时间加长点,可以封闭两个小时,条带一片黑和转膜时间没有多大关系,正常转就可以,一抗的浓度可以继续稀释,同时加大二抗浓度。如果还是这样,就要考虑和抗体公司扯皮了。
20楼2013-06-13 19:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stt19890101 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +10 大火山小火山 2026-04-05 10/500 2026-04-05 19:58 by 小蜗牛小蜗牛
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-03 14/700 2026-04-05 18:20 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:02 by arrow8852
[考研] 0703调剂 +11 拾玖壹 2026-04-04 12/600 2026-04-05 10:29 by 果冻大王
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 349求调剂 +11 zwjjjjjj 2026-03-31 11/550 2026-04-04 19:52 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 303求调剂 +9 DLkz1314. 2026-03-30 9/450 2026-04-03 18:34 by ls刘帅
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +9 恬淡ye 2026-03-31 10/500 2026-04-03 11:10 by txp1986
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 初试301,代码085701环境工程,本硕一致,四六级已过,有二区一作,共发表5篇论文 +6 axibli 2026-04-01 6/300 2026-04-02 13:42 by Ecowxq666!
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 307分求调剂 +14 (o~o) 2026-03-31 15/750 2026-04-01 20:43 by longlotian
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
信息提示
请填处理意见