应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
241/3返回列表123下一页
查看: 3018  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

stt19890101

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊

western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊Sample Text

黑乎乎的是目标蛋白  清晰的是看家蛋白   目标用TBST洗两个小时了
western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
6.4.JPG


western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊-1
E3-3-I3-3，A1-0-I1-0，C3-2-I3-2  2013.5.21.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-06-04 18:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:25:35
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:15
你这个黑乎乎的一片一般原因有2：一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行，目的蛋白含量也不高
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2013-06-05 15:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

1759005335

铁虫 (初入文坛)
洗膜的时候是不是几张片子压在一起了
赞一下 回复此楼
just do it
2楼2013-06-04 20:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\\\\\\\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-05 09:13:42
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:15:52
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:26
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-04 21:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:13:52
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:17:20
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-04 23:01:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1, ★有帮助 2013-06-05 17:18:58
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-05 08:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:19:46
感觉可能是一抗的问题。
赞一下 回复此楼
小兵一个
6楼2013-06-05 09:30:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-06-04 21:59:22
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的

我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2，我用的就是Santa的一抗，六个抗体都是这样，我用的都是脱脂奶粉封闭的，之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带，我压膜时间缩短也看不到特异条带，如果用牛血清蛋白封闭的话是多大浓度啊，
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-05 17:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by porphybaby at 2013-06-04 23:01:58
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？

不是啊 我蛋白上样量都至少80微克了，下面的是GAPDH看家很好的，缩短曝光时间也看不到目标
赞一下 回复此楼
9楼2013-06-05 17:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-05 08:24:09
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。

如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题？求解。我的蛋白上样至少在80微克，
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-05 17:18:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stt19890101 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KZyU1THERRVo 2026-08-18 3/150 2026-08-18 12:52 by vHWVV9D5Deb5
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 5/250 2026-08-18 11:25 by 無關想念
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭