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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot 封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊

western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊Sample Text

黑乎乎的是目标蛋白  清晰的是看家蛋白   目标用TBST洗两个小时了
western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊
6.4.JPG


western blot  封完抗体，目标蛋白看不到，但是看家很好是怎么回事啊-1
E3-3-I3-3，A1-0-I1-0，C3-2-I3-2  2013.5.21.JPG
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1楼 2013-06-04 18:48:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:25:35
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:15
你这个黑乎乎的一片一般原因有2：一是封闭效果不好二是压片时间过长 另外就是你这个抗体质量肯定不行，目的蛋白含量也不高
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7楼2013-06-05 15:28:55
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普通回帖

1759005335

铁虫 (初入文坛)
洗膜的时候是不是几张片子压在一起了
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just do it
2楼2013-06-04 20:56:30
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leechau2007

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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stt19890101(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\\\\\\\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-05 09:13:42
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:15:52
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-06 15:15:26
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的
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3楼2013-06-04 21:59:22
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:13:52
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:17:20
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？
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4楼2013-06-04 23:01:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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stt19890101: 金币+1, ★有帮助 2013-06-05 17:18:58
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。
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5楼2013-06-05 08:24:09
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
stt19890101: 金币+1 2013-06-05 17:19:46
感觉可能是一抗的问题。
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小兵一个
6楼2013-06-05 09:30:49
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-06-04 21:59:22
你做的是什么蛋白，有些蛋白是要用脱脂奶粉封闭效果好，有些要牛血清白蛋白效果好，还有就是有可能你抗体浓度用高了，再有你要是用的Santa的一抗，也有可能出现这个情况，买Santa的抗体要看运气的

我的蛋白是是低密度脂蛋白受体和胆固醇调节结合元件2，我用的就是Santa的一抗，六个抗体都是这样，我用的都是脱脂奶粉封闭的，之前老师再香港时候都是这样做的虽然特异性不好也能做出来条带，我压膜时间缩短也看不到特异条带，如果用牛血清蛋白封闭的话是多大浓度啊，
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8楼2013-06-05 17:15:36
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by porphybaby at 2013-06-04 23:01:58
天啊 怎么会这样子啊~~~~

是不是你的 那个 目标基因 太弱了 然后根本就暴不出来啊~~~~

你是不是 蛋白浓度放得太低了？？

不是啊 我蛋白上样量都至少80微克了，下面的是GAPDH看家很好的，缩短曝光时间也看不到目标
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9楼2013-06-05 17:17:11
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stt19890101

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-05 08:24:09
可能是目的蛋白的一抗不好，或者目的蛋白在样品中含量很低，超出western检出限。

如果能做出GAPDH是不是就能说明不是样品的问题？求解。我的蛋白上样至少在80微克，
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10楼2013-06-05 17:18:48
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