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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 要做抗体，如何选择用哪段序列来表达蛋白？
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intron5811

铜虫 (小有名气)

[交流] 要做抗体，如何选择用哪段序列来表达蛋白？已有4人参与

要做抗体，如何选择用哪段序列来表达蛋白？如何保证抗体的特异性？
我是新人，没做过表达蛋白来做抗体。
我有这个基因的序列，但是编码的蛋白很长，有大概一千个AA。 其中很重要的 domain 包括 C 端有一个，N 端有一个，N 端的很长，保守性也挺好，有若干个 HOMOLOG。如果选择N 端的话，会不会保守性不太好呢？或者我应该怎么选择呢？该用多长的片段呢？或者有没有直接的文献可以阅读参考呢？谢谢。
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1楼2012-01-31 08:46:03
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lder

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-01-31 19:06:39
表达抗体，最重要的是要表达出与抗原结合的区段。因为这部分是直接与你的抗原相结合的，只有正确表达了抗体的抗原结合区才能发挥免疫作用。
    一般抗体与抗原结合的部分为抗体的N段的CDR区。要弄清楚你的抗体抗原结合区，你可以做一个抗原结合表位作图，通过实验测定你的抗体的抗原结合区。也可以查阅文献，看看你的抗体是结合抗原的哪个抗原决定族的。
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2楼2012-01-31 10:29:54
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十口心思

木虫 (小有名气)
★
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把你的序列在IMGT中分析一下（或者在BLAST 中的IG blast)
如果要表达全长IG，需要注意 信号肽，抗体的肿链和轻链要分开表达，有的还要注意内含子。
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3楼2012-01-31 11:05:54
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2012-01-31 19:06:50
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gongeleven
4楼2012-01-31 11:12:30
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intron5811

铜虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-01-31 19:07:56
3 楼理解比较对。
“看看针对这个抗原蛋白的表位分析方面的资料，如果从来没有人做过，我就建议你自己做个表位分析吧。可以利用一些展示技术去做。 ：
这个不知道怎么做？表位分析？只知道这个基因有个家族， 家族间保守型还挺强的。在别的物种中，这个基因倒是有现成的商业抗体，但老板觉得还是自己的物种里自己表达蛋白做抗体比较好。所以就要我做了。有没有什么文献可以推荐来看看？到底该如何去分析这个序列然后拿出合适的片段去做克隆表达？
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5楼2012-01-31 14:07:56
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by lmxu0917 at 2012-01-31 11:12:30:
r如果我没理解错的话，你的意思是说想表达抗原蛋白，然后利用抗原蛋白再去做单克隆抗体或者是基因工程抗体！
抗原的表达和以下因素有关：
首先，你要确定的是你想筛出什么抗体，如果是中和活性抗体你就要选择能 ...

正解
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6楼2012-05-08 16:47:57
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